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一、什么是內(nèi)毒素
內(nèi)毒素，英文名為Endotoxin，是革蘭氏陰性菌菌體中存在的毒性物質(zhì)總稱，為多種革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的結(jié)構(gòu)。細(xì)菌內(nèi)毒素主要由磷脂、脂蛋白和脂多糖（LPS）組成，其中脂多糖（LPS）是天然或?qū)嶒?yàn)室制備的內(nèi)毒素復(fù)合物的生物活性部分，發(fā)揮毒性作用的是類脂質(zhì)A（Lipid A）。不同革蘭氏陰性菌的脂質(zhì)A結(jié)構(gòu)基本相似，所以由此類細(xì)菌引起的感染導(dǎo)致的毒性效應(yīng)大致相同，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。當(dāng)細(xì)菌死亡裂解或者自溶后，內(nèi)毒素會(huì)被大量釋放出來。內(nèi)毒素耐熱性和化學(xué)穩(wěn)定性很強(qiáng)，所以一般的方法很難去除或滅活內(nèi)毒素。
二、 為什么要檢測(cè)內(nèi)毒素
環(huán)境中廣泛存在的格蘭氏陰性菌容易污染生產(chǎn)過程，其裂解后會(huì)釋放出內(nèi)毒素，因內(nèi)毒素耐熱性和化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)而難以滅活，所以一旦有內(nèi)毒素污染進(jìn)入血液，即使極少量也能引起發(fā)熱休克等嚴(yán)重反應(yīng)，因而內(nèi)毒素與其他已知熱原污染物相比，顯示更強(qiáng)的熱原性。所以內(nèi)毒素被為應(yīng)加以控制的物質(zhì)，對(duì)用于人和動(dòng)物的注射藥品如化學(xué)藥品、抗生素、放射性藥品、生物制品以及醫(yī)療器械如透析液、植入式器械等的原輔料、中間和放行產(chǎn)品均需要進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)，以確保制品的安全性。
三，內(nèi)毒素檢測(cè)方法：根據(jù)反應(yīng)原理，內(nèi)毒素檢測(cè)方法可分為以下4種：凝膠法、濁度法、顯色法和重組C因子法。
鱟試劑檢查法：20世紀(jì)70年代，分為凝膠法、濁度法和顯色基質(zhì)法。優(yōu)點(diǎn)：易操作，靈敏度高，可用于內(nèi)毒素定量檢測(cè);缺點(diǎn)：鱟血批次間有差異；對(duì)革蘭氏陰性菌以外的內(nèi)毒素不靈敏；易受β-葡聚糖（β-Glucans）影響而產(chǎn)生假陽性；鱟受到動(dòng)物保護(hù)，無法大批量供應(yīng)。
重組C因子法（rFc）：21世紀(jì)初，通過重組方法產(chǎn)生C因子。優(yōu)點(diǎn)：C因子來源穩(wěn)定，受批次影響??；操作簡(jiǎn)單快速；更強(qiáng)的抗干擾能力（不受β-glucans影響）；專屬性好。缺點(diǎn)：來源于不同品種鱟血蛋白序列的重組蛋白對(duì)內(nèi)毒素的反應(yīng)性可能不同。
四、內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)過程中的常見問題和注意事項(xiàng)
Q1：用于內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)的耗材和試劑如何選擇？
A1：一般選擇內(nèi)毒素試劑盒廠家配套的試劑和耗材，如需額外購買，一定要選擇除熱原的產(chǎn)品用于內(nèi)毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)（除熱原指內(nèi)毒素濃度小于 0.005 EU/mL）；另外也可采用超濾法、活性炭法、熱處理法、化學(xué)降解法、親和色譜法等。
Q2：如何選擇鱟試劑的靈敏度值？
A2：通常因?yàn)榇郎y(cè)樣本中存在干擾因子，所以樣本通常需要進(jìn)行處理或者稀釋。建議選擇靈敏度高的鱟試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
問3：是否每一批注射用水檢查細(xì)菌內(nèi)毒素時(shí)都需要加入陽性對(duì)照？
答3：是的
問4：細(xì)菌內(nèi)毒素工作品用檢查用水稀釋后，實(shí)驗(yàn)剩下的可以保存再利用嗎？
答4：稀釋的內(nèi)毒素溶液靜置時(shí)間超過10分鐘，用前在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘，配置時(shí)間超過4小時(shí)的內(nèi)毒素溶液應(yīng)丟棄。
上?，|馳，生物行業(yè)前沿技術(shù)提供者。成立于2015年，坐落于上海，被列入張江科學(xué)城重點(diǎn)機(jī)構(gòu)。公司深耕生物制藥領(lǐng)域，和Lonza、PerkinElmer.lsoPlexis、ThermoFisher、CBS、賽橋等多品牌達(dá)成戰(zhàn)略合作，服務(wù)中國(guó)800余家生物制藥客戶。經(jīng)過多年發(fā)展，公司獲得IS09001、ISO14001、OHSAS18001質(zhì)量體系認(rèn)證以及二類、三類醫(yī)療器械經(jīng)營(yíng)許可。具有先進(jìn)技術(shù)生產(chǎn)力的產(chǎn)品，完善的售前售后體系，資質(zhì)齊全的專業(yè)服務(wù)團(tuán)隊(duì)，強(qiáng)大的供應(yīng)鏈和物流保障，滿足多樣化需求，助力客戶革新升級(jí)。
