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當(dāng)CRISPR 遇見(jiàn)Namocell | 微管蛋白聚合抑制劑與癌癥研究最新進(jìn)展
2023年1月29日，美國(guó)Harutyun Khachatryan研究團(tuán)隊(duì)在Biomolecules雜志發(fā)表了文章Identifification of Inhibitors of Tubulin Polymerization Using a CRISPR-Edited Cell Line with Endogenous Fluorescent Tagging of β-Tubulin and Histone H1，提出了一種新的方法來(lái)識(shí)別微管蛋白聚合抑制劑，利用內(nèi)源性熒光標(biāo)記β-微管蛋白和組蛋白H1的CRISPR - Hela細(xì)胞系來(lái)鑒定微管蛋白聚合抑制劑。該方法有助于研究活細(xì)胞內(nèi)源性蛋白，而不使用細(xì)胞固定、免疫染色或重組蛋白過(guò)表達(dá)。
本研究使用β-微管蛋白（mCTover3）、組蛋白H1（mTagBFP2）和p62-SQSTM1（mRuby3）熒光蛋白， 用CRISPR和FAST-HDR載體系統(tǒng)開發(fā)HeLa細(xì)胞，采用Hana單細(xì)胞分離儀（Namocell）進(jìn)行單細(xì)胞分選，使用綠色熒光通道，并分選到96孔板中進(jìn)行單細(xì)胞克隆培養(yǎng)，然后選擇一個(gè)具有均勻明亮β-微管蛋白熒光的細(xì)胞克隆大量擴(kuò)增得到實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。
后續(xù)實(shí)驗(yàn)通過(guò)高內(nèi)涵成像分析來(lái)動(dòng)態(tài)觀察微管蛋白聚合情況。用已知的微管蛋白聚合抑制劑、秋水仙堿和長(zhǎng)春新堿處理此細(xì)胞，并證實(shí)了由此產(chǎn)生的微管蛋白聚合抑制的表型變化。此外，作者篩選了429個(gè)激酶抑制劑文庫(kù)，鑒定出三種抑制微管蛋白聚合的化合物（ON-01910、HMN-214和KX2-391）。
值得注意的是，研究中采用Namocell 單細(xì)胞分離儀幫助作者快速、輕柔、高效地獲得活性高的CRISPR - Hela單細(xì)胞，利于單克隆培養(yǎng)及擴(kuò)增，為后續(xù)更多實(shí)驗(yàn)提供足夠的細(xì)胞工具。
Namocell單細(xì)胞分離儀
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輕 柔 - 壓力小于 2psi，保護(hù)細(xì)胞活性
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快 速 - 分選快（1min），初始化快（2min），樣本切換快（1min）
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精 準(zhǔn) - 配備 2-11 色熒光通道，精準(zhǔn)捕獲目的細(xì)胞
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無(wú) 菌 - 一次性無(wú)菌芯片，隔絕樣本污染
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輕 松 - 無(wú)需調(diào)校，開機(jī)即用
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輕 巧 - 體積小巧，方便搬動(dòng)
Namocell 是一家成立于美國(guó)硅谷的專注于單細(xì)胞分選技術(shù)的生物儀器公司，2022年7月加入Bio-Techne。公司自主研發(fā)的微流控單細(xì)胞分選平臺(tái)，使復(fù)雜的單細(xì)胞分選變得極其簡(jiǎn)單快速，極大地推動(dòng)了單細(xì)胞分析在基礎(chǔ)研究和臨床上的應(yīng)用。我們的單細(xì)胞分選儀已在細(xì)胞株的構(gòu)建，單克隆抗體的篩選，細(xì)胞基因編輯，基因及細(xì)胞治療，癌癥液體活檢，癌癥免疫治療，產(chǎn)前基因篩查，噬菌體展示，單細(xì)胞基因組學(xué)等多方面得到廣泛的應(yīng)用。目前Namocell微流控單細(xì)胞分選儀已經(jīng)被世界各大研究機(jī)構(gòu)及生物制藥公司廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，例如美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局 (FDA)，美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心(CDC)，哈佛大學(xué)，斯坦福大學(xué)，麻省理工大學(xué)，Genentech，Merck，Biogen，BMS，Janssen，Boehringer-Ingelheim等。