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單細胞分選要考慮的問題及優(yōu)勢介紹
閱讀：408 發(fā)布時間：2022-10-18
單細胞分選通過細胞識別、細胞挑取和細胞轉(zhuǎn)移、跟蹤實時分析四個步驟可以實現(xiàn)對懸浮體系中任何單一類型細胞或稀有細胞（如循環(huán)腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞以及血液、骨髓中相關(guān)細胞等）的抓取分離、分析，細胞可以轉(zhuǎn)移到PCR管等后續(xù)實驗裝置。
利用流式細胞分選技術(shù)進行的單細胞分選，具有精度高、通量大、分選參數(shù)多，成本相對低等優(yōu)點，通過流式分選出足夠多的符合要求的單細胞進行下游實驗并沒有那么容易。
一、下面三方面是要考慮的問題：
1、活性
細胞活性狀態(tài)對后續(xù)實驗而言很重要，就拿轉(zhuǎn)錄組分析為例，無論是RNA-Seq還是高通量表達譜芯片技術(shù)，都需要高質(zhì)量的RNA樣本，細胞活性不好或死細胞會直接導(dǎo)致RNA降解，實驗無法繼續(xù)。
2、精度
流式分選是精密度高的儀器，稍稍不同的參數(shù)（激光、液流等）的設(shè)置都會直接造成結(jié)果偏差；另外既然是想研究單細胞，那么就得確保分選得到的確為單個細胞，否則同樣沒有意義。
3、效率
自動化替代人工無疑是提高效率、節(jié)省成本的舉措；當你需要分選超低含量的細胞時，務(wù)必是個長時間工程，鞘液用光時，其更換繁瑣度、耗時、連續(xù)性等都是需要考慮的。
二、單細胞分選優(yōu)勢：
1、可直接從培養(yǎng)皿中進行細胞分選。
2、分離粘結(jié)活細胞的細胞亞群，分離熒光或者冷光標記。
3、無標記的和熒光的細胞都可通過軟件進行自動識別。
4、可確保細胞分離后活力，并且可培養(yǎng)。
5、分選熒光分子探針標記的特定細胞。
6、單細胞收集進行進一步培養(yǎng)、克隆，RNA或者蛋白質(zhì)制備。
7、免疫制備，進行目標細胞分類。
8、可對各種粘結(jié)細胞進行分類。
9、細胞篩選前的細胞培養(yǎng)。
10、一般的分選過程只需幾分鐘就可完成。
11、使用安裝在顯微鏡上的熒光濾片可實現(xiàn)多通道監(jiān)測。