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淺談單克隆篩選的特點和篩選方法
閱讀：4894 發(fā)布時間：2022-5-6
單克隆篩選是根據(jù)細(xì)胞所具有的特性將單個細(xì)胞從混合的細(xì)胞樣品中分離出來的?種技術(shù)，是抗體制備細(xì)胞株優(yōu)化、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建、藥物靶點篩選等應(yīng)?中重要的?環(huán)，能夠更好地為不同鄰域科學(xué)研究和藥物研發(fā)提供支持。
一、特點：
1、通用性篩選：適用于多種細(xì)胞，無需攜帶抗性熒光標(biāo)簽。
2、單列線性模式：適用于高價值細(xì)胞。
3、提供克隆性證據(jù)：可為每個克隆提供克隆形成圖像。
4-溫和的微流控技術(shù)：更高存活率，更低損失率。
二、單克隆篩選的方法
1、有限稀釋法：克隆/亞克?。悍蛛x單個細(xì)胞置入多孔培養(yǎng)板的每個孔中培養(yǎng)。然后,用ELISA檢測培養(yǎng)上清來判斷是否有產(chǎn)生目的抗體的單克隆生成。
2、檢測每孔細(xì)胞是否產(chǎn)生針對目的抗原表達的抗體，所以篩選的條件是兩層意思：單個細(xì)胞單孔培養(yǎng)保證每個孔中的細(xì)胞在產(chǎn)生抗體時是針對同一抗原的同一抗原決定簇產(chǎn)生的的，但每個孔中細(xì)胞卻不一定都能產(chǎn)生抗體，把那些不產(chǎn)生抗體的細(xì)胞淘汰，對能分泌針對抗原某一決定簇抗體的陽性細(xì)胞選擇下來繼續(xù)克隆，從而保證大量的生產(chǎn)所需抗體。
3、對選擇下來的細(xì)胞進行克隆方法有兩種：一種可以在體外培養(yǎng)；一種可以一直到小鼠腹腔中增殖,即可從中提取所需要的單克隆抗體。
三、實驗結(jié)果：
實驗結(jié)果以總細(xì)胞孔（如96孔）中出現(xiàn)克隆孔統(tǒng)計出克隆百分率，并可進一步按單細(xì)胞孔、雙細(xì)胞孔、多細(xì)胞孔分別計算。
四、注意事項：
1、注意無菌操作，一旦發(fā)現(xiàn)污染（孔）必須及時處理；
2、計數(shù)細(xì)胞要求準(zhǔn)確，稀釋量亦要準(zhǔn)確，否則將造成一孔多細(xì)胞克隆或克隆百分離太低；
3、在計數(shù)克隆出現(xiàn)率之前，不宜更換培養(yǎng)液，也不宜強烈振動培養(yǎng)板；
4、做克隆化培養(yǎng)的小牛血清必須是優(yōu)質(zhì)血清；
5、若做克隆抗體檢測時，特別要保護細(xì)胞的生長狀況，防止細(xì)胞生長不良甚至丟失。