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單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組是一項新開發(fā)的技術(shù)
閱讀：715 發(fā)布時間：2021-9-22
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的技術(shù)在目前的科研實驗中應(yīng)用越來越多。最初的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組我們都是把一群細(xì)胞或一個器官混合到一起去提取RNA，獲得的是每個細(xì)胞中RNA表達量的平均值，單細(xì)胞是把每個細(xì)胞單獨分出來去提取RNA，然后建庫測序，獲得是是單個細(xì)胞的表達值。在每個細(xì)胞里面基因的表達具有隨機性，且存在異質(zhì)性。
細(xì)胞群中會存在不同類型的細(xì)胞，尤其是當(dāng)我們對整個組織或者器官進行測序時，它們本身就是由不同類型的細(xì)胞組成的，而我們用普通轉(zhuǎn)錄組來測序，相當(dāng)于掩蓋住了這些不同的細(xì)胞類型的差異，展示的是整個組織的平均的狀態(tài)，所以說單細(xì)胞從這個來看跟普通轉(zhuǎn)錄組就不同在是用一個細(xì)胞測，不是用一堆細(xì)胞測。
單細(xì)胞的RNA量比較少，所以要擴增的話循環(huán)數(shù)就會比較多，會引入一些PCR擴增帶來的偏好性，為了解決這個問題，就有了現(xiàn)在的技術(shù)—體外轉(zhuǎn)錄，這個技術(shù)不通過擴增，在RNA上加一個T7的啟動子，讓它一輪一輪的轉(zhuǎn)錄出新的RNA，實現(xiàn)線性擴增。
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序主要應(yīng)用于特別難獲取的細(xì)胞，比如說胚胎發(fā)育早期，合子，二細(xì)胞，四細(xì)胞，八細(xì)胞期，這時候因為每一個階段細(xì)胞的數(shù)目都是很有限的，當(dāng)時就想著能夠開發(fā)一個技術(shù)對這種含量特別少的細(xì)胞能夠提取建庫成功，然后獲得它們的表達量，從而來研究這些常規(guī)轉(zhuǎn)錄組所研究不了的生物過程，所以當(dāng)時的發(fā)展是盡量提高測序的深度。
轉(zhuǎn)錄組可用于多種物種的組織，包括小鼠腦和人乳腺癌組織、人心臟組織和擬南芥花序組織，是一項新開發(fā)的技術(shù)，已顯示可用于小鼠大腦的冷凍切片分析。這些直接的mRNA捕獲方法不需要其他的設(shè)備，具有相對簡單的分析方法，并且可能大規(guī)模應(yīng)用于許多組織。
Namocell單細(xì)胞分離儀可以快速、高效、輕柔地幫助用戶將目的單細(xì)胞分離至8聯(lián)排，96孔板或者384孔板中，用于后續(xù)的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組檢測。對于用戶的特殊細(xì)胞樣本如少量細(xì)胞、極低陽性含量的稀有細(xì)胞等，Namocell都可以提供更好的解決方案，為用戶提供更好的單細(xì)胞。
上圖顯示的是相同細(xì)胞樣本通過FACS流式分選和Namocell的Hana單細(xì)胞分離儀分選得到的單細(xì)胞，分別進行單細(xì)胞測序得到的結(jié)果?？梢郧宄乜吹剑ㄟ^Hana分離后的單細(xì)胞狀態(tài)更好，能夠有更多有用的信息被檢測到。