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上海單細(xì)胞分離日趨火爆的原因有哪些？
閱讀：525 發(fā)布時(shí)間：2020-2-5
上海單細(xì)胞分離日趨火爆的原因有哪些？
上海單細(xì)胞分離從異質(zhì)性的細(xì)胞群體中分離單細(xì)胞，目前主要有三種選擇：手動(dòng)分離、熒光激活細(xì)胞分選和微流體技術(shù)。當(dāng)然，除了成熟的方法，巧妙的新方法也在不斷涌現(xiàn)，能以更高的準(zhǔn)確性和特異性來分離單細(xì)胞。
如果你想要的細(xì)胞已經(jīng)處于懸浮狀態(tài)（比如循環(huán)腫瘤細(xì)胞），而且含量相對(duì)比較豐富，那么流式分選將是你的理想選擇。如果樣本是實(shí)體組織，我們可以用酶分解掉膠原和其他細(xì)胞外蛋白。不過，酶學(xué)消化對(duì)細(xì)胞影響較大，甚至可能改變基因轉(zhuǎn)錄情況。把組織細(xì)胞制備成懸液之后，我們就可以通過特異性的熒光標(biāo)簽分離出自己想要的細(xì)胞。進(jìn)一步拿到單細(xì)胞是比較棘手的一步，也許要借助微流體設(shè)備。
將細(xì)胞分散到懸液中，會(huì)失去它們?cè)诮M織里的位置信息。如果你想了解單細(xì)胞所處的環(huán)境和它們以前的鄰居，就需要用到激光捕獲顯微切割技術(shù)。這種技術(shù)通過掃描組織切片來定位感興趣的細(xì)胞，并將其提取出來。操作者需要非常小心，以免切到細(xì)胞或細(xì)胞核。數(shù)量極為稀少的細(xì)胞只能用毛細(xì)管等器具手動(dòng)獲取。
上海單細(xì)胞分離優(yōu)點(diǎn)：1. 細(xì)胞表面標(biāo)志物的特異標(biāo)記。2. 多個(gè)同時(shí)存在的標(biāo)記可確保特定細(xì)胞的分離。3. 可將細(xì)胞分選至96孔或384孔板，純度接近100%
單細(xì)胞測(cè)序日趨火爆的原因很大程度上得益于單細(xì)胞分離技術(shù)的不斷完善。利用激光顯微切割儀，操作者可以將組織內(nèi)單一細(xì)胞或細(xì)胞群切割下來進(jìn)行研究，避免間質(zhì)細(xì)胞及一些炎癥細(xì)胞造成背景“污染”，可以了解到細(xì)胞的位置信息。但該方法相鄰細(xì)胞容易污染，另外在組織固定及激光切割的過程中可能會(huì)破壞細(xì)胞的完整性，對(duì)細(xì)胞核酸損傷較大，從而影響后續(xù)的遺傳物質(zhì)的擴(kuò)增。