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單細(xì)胞分選的使用方法及用途
閱讀：483 發(fā)布時間：2019-9-20
單細(xì)胞分選的使用方法及用途
單細(xì)胞分選用流式細(xì)胞儀將特定的細(xì)胞分選出來的技術(shù)，在分選前，細(xì)胞要被戴上特殊的符號，所用的符號細(xì)胞的探針是可以同待分選細(xì)胞外表特征性蛋白（抗原）結(jié)合的抗體，而這種抗體又可以同某種熒光染料結(jié)合。
當(dāng)結(jié)合有熒光染料的探針與細(xì)胞群溫育時，探針就會同具有特異外表抗原的細(xì)胞緊緊結(jié)合，因?yàn)榭贵w的結(jié)合，被結(jié)合的細(xì)胞帶上了熒光符號，細(xì)胞被符號之后，除掉游離的抗體，并將細(xì)胞進(jìn)行稀釋。當(dāng)稀釋的細(xì)胞進(jìn)入超聲波振蕩器時，極稀的細(xì)胞懸浮液形成很小的液滴，一個液滴中只含有一個細(xì)胞。液滴一旦形成并經(jīng)過激光束時，激光束激發(fā)結(jié)合在細(xì)胞外表抗體分子成為一種標(biāo)簽。
當(dāng)液滴逐一經(jīng)過激光束時，受到兩種檢測器的檢測：如果液滴中含有細(xì)胞就會激活干涉檢測器，只有帶有熒光符號細(xì)胞的液滴才會激活熒光檢測器，當(dāng)帶有熒光符號的液滴經(jīng)過激光束時，將兩種檢測器一起激活，引起液滴充電信號使鞘液帶上負(fù)電荷。因?yàn)橐旱螏в胸?fù)電荷，移動時就會向正極移動，進(jìn)入到熒光符號細(xì)胞收集器中。單細(xì)胞分選請用50%的條件培養(yǎng)基，并將血清的比重提高到20%，條件培養(yǎng)基就是用過的培養(yǎng)基， 里面會含有細(xì)胞因子和其他分泌物， 這有助細(xì)胞存活。
如果是含有非熒光符號細(xì)胞的液滴進(jìn)入激光束，只會被干涉檢測器檢測到，成果使充電信號將液滴的鞘液帶上正電荷，從而在移動時偏向負(fù)極，被非熒光符號細(xì)胞收集器所收集。如果是不含有單細(xì)胞分選的液滴進(jìn)入激光束，則不會被任何檢測器所檢測，因此不會產(chǎn)生充電信號，液滴的鞘液不會帶上任何電 荷，所以在移動時不受任何影響直接進(jìn)入非檢測的收集器。
單細(xì)胞分選的原理其實(shí)跟分析相似，也是由鞘液帶去給激光分析，根據(jù)所染的熒光來得出結(jié)果，而分選的不同就是細(xì)胞在經(jīng)過激光后也會經(jīng)過噴嘴，單個細(xì)胞會以單液滴的分式流出，再按分析結(jié)果由高壓電板賦予相應(yīng)的電荷，將其分選到不同的收集管中。單細(xì)胞分選有不同大小的噴嘴，噴嘴越小分選的速度就越快。所以挑選噴嘴要視乎細(xì)胞的大小，一般來說噴嘴需要比細(xì)胞大4-6倍。如果選的噴嘴太小，會令細(xì)胞容易受壓 失去活性，也會影響分選的穩(wěn)定性。