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150810-68-7，5-TAMRA N-succinimidyl ester的使用方法
閱讀：20 發(fā)布時(shí)間：2025-7-24| 提 供 商 | 陜西新研博美生物科技有限公司 | 資料大小 | 1MB |
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活性基團(tuán)：琥珀酰亞胺酯（NHS酯），可與生物分子中的伯胺（-NH?）反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。
熒光特性：屬于羅丹明類熒光染料，具有高光穩(wěn)定性和良好的水溶性。
物理參數(shù)：
CAS：150810-68-7
中文名：5-TAMRA 琥珀酰亞胺酯
英文名：5-TAMRA N-succinimidyl ester
分子式：C29H25N3O7
分子量：527.52
規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)：1mg、5mg、10mg
試劑廠家：陜西新研博美生物科技有限公司
相關(guān)應(yīng)用：
生物標(biāo)記：
蛋白質(zhì)和抗體標(biāo)記：用于熒光免疫染色、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)等。
核酸標(biāo)記：用于標(biāo)記氨基修飾的DNA/RNA探針，適用于熒光原位雜交（FISH）。
熒光探針開發(fā)：作為FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）的供體或受體。
活細(xì)胞成像：低毒性和高光穩(wěn)定性，適用于活細(xì)胞的長時(shí)間動(dòng)態(tài)觀察。
使用方法：
一、蛋白制備
1) 為獲得最佳標(biāo)記效果，請(qǐng)制備蛋白 (抗體) 濃度為 2 mg/mL。
2) 蛋白溶液的 PH 值為 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0，應(yīng)使用 1 M 碳酸氫鈉進(jìn)行調(diào)節(jié)。
3) 如果蛋白濃度低于 2 mg/mL，標(biāo)記效率會(huì)大大降低。為獲得最佳標(biāo)記效率，建議終蛋白濃度范圍為 2-10 mg/mL。
4) 蛋白必須在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 的緩沖液中，并且銨離子，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。
2.染料制備
將無水 DMF 加入 5-TAMRA-SE 小瓶中，制成 10 mM 儲(chǔ)備液。通過移液器或渦旋混合均勻。
3.染料用量的計(jì)算
反應(yīng)所需的 5-TAMRA-SE 的量取決于待標(biāo)記蛋白的量，5-TAMRA-SE 與蛋白的最佳摩爾比為 10 左右。
Example：假設(shè)所需的 marker protein 為 500 μL 2 mg/mL IgG (MW=150,000)，用 100 μL DMF 溶解 1 mg 5-TAMRA-SE，得到所需的 5-TAMRA-SE 體積為 3.53 μL，詳細(xì)計(jì)算過程如下：
1) mmol (IgG) =mg/mL (IgG) ×mL (IgG)/MW (IgG) =2 mg/mL × 0.5 mL/150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol
2) mmol (5-TAMRA-SE) =mmol (IgG) × 10=6.7×10-6 mmol×10=6.7 × 10-5 mmol
3) μL (5-TAMRA-SE) = mmol (5-TAMRA-SE) ×MW (5-TAMRA-SE)/mg/μL (5-TAMRA-SE) =6.7 ×10-5 mmol ×527.52 mg/mmol/0.01 mg/μL=3.53 μL (5-TAMRA-SE)
4.運(yùn)行偶聯(lián)反應(yīng)
1) 將適量新鮮制備的 10 mg/mL 5-TAMRA-SE 緩慢加入到 0.5 mL 蛋白質(zhì)樣品中
在溶液中，輕輕搖動(dòng)混勻，然后短暫離心，將樣品收集在反應(yīng)管底部。請(qǐng)勿混勻，以免蛋白樣品變性失活。
2) 將反應(yīng)管置于避光處，在室溫下間隔輕輕孵育 60 分鐘。10-15 分鐘，輕輕逆轉(zhuǎn)反應(yīng)
5.純化偶聯(lián)物
以下方案是使用 SepHadex G-25 柱純化染料-蛋白偶聯(lián)物的示例。
1) 根據(jù)制造說明準(zhǔn)備 SepHadex G-25 柱。
2) 將反應(yīng)混合物加載到 SepHadex G-25 柱的頂部。
3) 一旦樣品在頂部樹脂表面下方運(yùn)行，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
4) 向所需樣品添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱純化。合并含有所需染料-蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的級(jí)分。注意事項(xiàng)：
結(jié)構(gòu)式：
相關(guān)試劑產(chǎn)品：
7-Azido-4-methylcoumarin
Rhod-2 AM
Mito-Tracker Orange CMTMRos
Mito-Tracker Red
Cy5-Phosphoramidite
Lissamine rhodamine B
BODIPY FL C5-HPC
Rhodamine dithenoyl hydrazide
800CW acid
IRDye 800 DBCO
Coumarin-C2-exo BCN
Sulfo-Cy5.5 Azide
Sulfo-Cy5-Mal
Alexa fluor 488 azide ditriethylamine
Pyrene-1,3,6,8-tetrasulfonic acid tetrasodium
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