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高親水性：減少染料聚集，提升信號(hào)清晰度。

低分子量：對(duì)標(biāo)記生物分子的結(jié)構(gòu)和功能影響極小。

穩(wěn)定性強(qiáng)：光穩(wěn)定性優(yōu)于傳統(tǒng)染料，適合長(zhǎng)時(shí)間顯微觀察和單分子檢測(cè)。

熒光特性：強(qiáng)吸收、高熒光量子產(chǎn)率、高光穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。

基本參數(shù)：  

英文名：ATTO 495 NHS Ester，AT 495 NHS Ester  

分子式：C25H29ClN4O8  

分子量：548.97 

規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)：1mg、5mg、10mg 

試劑廠家：陜西新研博美生物科技有限公司

相關(guān)應(yīng)用：

超分辨率顯微鏡：如PALM、dSTORM和STED，因其單分子檢測(cè)能力和抗光漂白特性。

流式細(xì)胞術(shù)（FACS）：標(biāo)記抗體或探針，用于多色檢測(cè)。

核酸與蛋白質(zhì)標(biāo)記：

熒光原位雜交（FISH）：標(biāo)記生物素化核酸探針。

蛋白質(zhì)相互作用研究：通過(guò)生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)追蹤分子結(jié)合。

其他應(yīng)用：適用于單分子檢測(cè)和高分辨率顯微鏡技術(shù)。

使用方法：

1. 蛋白質(zhì)標(biāo)記

準(zhǔn)備蛋白質(zhì)溶液：

將目標(biāo)蛋白質(zhì)（如抗體）溶解在pH 7.2-7.4的PBS中，濃度建議大于2 mg/mL。

如果蛋白質(zhì)溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中，需通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾去除游離胺或銨鹽。

準(zhǔn)備染料溶液：

將ATTO 495 NHS Ester溶解在無(wú)水DMSO中，制備10 mM的染料儲(chǔ)備液。

避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)記反應(yīng)：

按摩爾比1:10（蛋白質(zhì):染料）將蛋白質(zhì)溶液與染料儲(chǔ)備液混合。

在室溫下避光反應(yīng)2小時(shí)。

純化：

通過(guò)凝膠過(guò)濾（如Sephadex G-25柱）或超濾離心（如Amicon Ultra離心管，3–10 kDa截留分子量）去除未反應(yīng)的染料。

2. 核酸標(biāo)記

標(biāo)記氨基修飾的寡核苷酸：

將氨基修飾的寡核苷酸溶解在pH 8.5的碳酸鹽緩沖液中。

按摩爾比1:10（寡核苷酸:染料）加入ATTO 495 NHS Ester。

在室溫下避光反應(yīng)2小時(shí)。

通過(guò)凝膠過(guò)濾或超濾離心純化。

3. 流式細(xì)胞術(shù)（FACS）

標(biāo)記抗體：

按上述蛋白質(zhì)標(biāo)記方法標(biāo)記抗體。

將標(biāo)記后的抗體用于細(xì)胞染色，按照標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞術(shù)程序進(jìn)行。

4. 熒光原位雜交（FISH）

標(biāo)記核酸探針：

按上述核酸標(biāo)記方法標(biāo)記生物素化的核酸探針。

將標(biāo)記后的探針用于FISH實(shí)驗(yàn)。 

注意事項(xiàng)：

避免頻繁凍融：染料儲(chǔ)備液應(yīng)分裝保存，避免反復(fù)凍融。

保持干燥：操作過(guò)程中保持干燥，避免染料受潮。

現(xiàn)配現(xiàn)用：染料儲(chǔ)備液現(xiàn)配現(xiàn)用，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。

產(chǎn)品用途：僅供科研實(shí)驗(yàn)使用

結(jié)構(gòu)式：

相關(guān)試劑產(chǎn)品：

ER Thermo Yellow

7-Methoxy-4-(trifluoromethyl)coumarin

Fluorescein O-methacrylate

Vari Fluor 405-Streptavidin

TAMRA azide, 6-isomer

6-Aminofluorescein

HOE 32021

FITC-hyodeoxycholic acid

DMANI

Fluorescein hydrazide

DiSBAC2(3)

8-Phenyl-BODIPY 505/515

Tetramethylrhodamine-5-iodoacetamide

BDY FL-X, SE

Vari Fluor 555 SE

Human Serum Albumin-Cy3 

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