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上海吉至生化科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
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2023-4-7 閱讀(510)
1.轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞于6孔板，5×104每孔，第二天轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到60%-70%每孔。
2.轉(zhuǎn)染前半小時(shí)將完、全培養(yǎng)基換無(wú)血清培養(yǎng)基1.9 ml。
3.A液：RNA 100 pmol/DNA 2μg （根據(jù)核酸類型不同，用量不同）加入50 ul Opti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基，輕輕混勻，室溫靜置5min。
4.B液：脂質(zhì)體使用前輕輕混勻，脂質(zhì)體5ul 加入50 ul Opti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基，輕輕混勻，室溫靜置5min。
5.B液加入到A液中，用槍輕輕混勻，室溫靜止20min。
6.將混合液均勻分散慢慢滴加到6孔板細(xì)胞中，邊滴加邊前后左右十字交叉輕輕搖晃。
7.孵箱37℃培養(yǎng)4~6h，然后將無(wú)血清培養(yǎng)基換成完、全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
8.mRNA 水平的檢測(cè)：在轉(zhuǎn)染后24-48h后，用Real-time PCR的方法在mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)。
9.蛋白水平的檢測(cè)：在轉(zhuǎn)染后48-72h后，用Western-blot或免疫組化的方法在蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)。
