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DAPI染色原理介紹

2022-6-15 閱讀(3333)

DAPI 是一種可以與 DNA 進(jìn)行強(qiáng)力結(jié)合的常用的熒光染料。DAPI 結(jié)合至雙鏈 DNA小溝 的AT堿基對(duì)位置,一個(gè) DAPI分子 可占據(jù)約三個(gè)堿基對(duì)位置。結(jié)合到 雙鏈DNA 上的 DAPI分子 后的熒光強(qiáng)度大約可提高20倍,一般采用熒光顯微鏡進(jìn)行觀測(cè)即可,依據(jù)熒光強(qiáng)度可以確定出DNA的量。此外,因 DAPI 可透過(guò)完整的細(xì)胞膜,也可用于 活細(xì)胞 和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,DAPI染料 是利用紫外光波長(zhǎng)的光線進(jìn)行激發(fā)。單獨(dú) DAPI 的最大吸收波長(zhǎng)是340nm,DAPI的最大發(fā)射波長(zhǎng)是488nm;當(dāng) DAPI 與 雙鏈DNA 進(jìn)行結(jié)合,DAPI的最大吸收和發(fā)射波長(zhǎng)分別為:364nm,454nm(10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl,10 mM EDTA),其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI也可與RNA進(jìn)行結(jié)合,但產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度只有約為DNA結(jié)合的熒光強(qiáng)度的1/5,其發(fā)散光的波長(zhǎng)范圍約在500nm左右。




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