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His-Tag標(biāo)記是什么方法

2020-12-9 閱讀(1114)

His-Tag標(biāo)記可與多種金屬離子發(fā)生特殊的相互作用,包括Ca2+、Mg2+、Ni2+、Co2+等,其中以鎳離子使用較為廣泛。

在重組蛋白末端融合多個(gè)組氨酸成串的肽段(常用6個(gè)組氨酸)。憑借此組氨酸肽段與二價(jià)金屬離子(鎳、鋅等)的螯合作用,便于用金屬螯合親和層析純化蛋白質(zhì)。也可以用針對(duì)組氨酸肽段的抗體來(lái)檢測(cè)該融合蛋白。6個(gè)組氨酸的肽段可簡(jiǎn)寫(xiě)為6×His。

His-tag:組氨酸標(biāo)簽(Histidine-tag),基因工程構(gòu)建的純化標(biāo)記通行的標(biāo)記之一,是在蛋白zhuan質(zhì)的氨基端加上6~shu10個(gè)組氨酸,在一般或變性條件(如8M尿素)下借助它能與Ni2+螯合柱緊緊結(jié)合的能力,用咪唑洗脫,或?qū)H降至5.9使組氨酸充分質(zhì)子化,不再與結(jié)合Ni2+使之得以純化。



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