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SD大鼠一氧化氮（NO）試劑盒使用說明書
閱讀：162 發(fā)布時間：2019-6-17SD大鼠一氧化氮（NO）試劑盒使用說明書
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中 SD 大鼠一氧化氮（NO）水平。用純化的 SD 大
鼠一氧化氮（NO）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入一氧化
氮（NO），再與 HRP 標記的一氧化氮（NO）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，
經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下
轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的一氧化氮（NO）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm
波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中 SD 大鼠一氧化氮（NO）濃度。
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
4 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
5. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
6 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
7 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
8 溫育：操作同 3。
9 洗滌：操作同 5。
10 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.
11 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
12 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。