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ELISA實驗標準曲線的技術解答

閱讀:456          發(fā)布時間:2023-7-3

 ELISA原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理,對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,分三個部分組成:免疫識別,信號輸出和數(shù)據(jù)處理。標準曲線做的好與壞會直接影響到ELISA實驗的結果,甚至是關系到實驗的成敗。那么在ELISA實驗中,這一方面該如何處理呢?下面對ELISA實驗標準曲線的技術解答內容:

    1.設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度*陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內。

    2.采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。

    3.樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。

    4.做出的標準曲線相關系數(shù)因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。

    6.檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。

    7.標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。

繪制標準曲線方法:

    標準曲線濃度得到后,可通過計算器、Excell或SPSS統(tǒng)計軟件進行繪制,并得到相關的回歸方程(即計算公式)和相關系數(shù)(回歸系數(shù))。Excell軟件比較好用一些;SPSS也行,不過是英文的,初學者不是很容易掌握;計算器嘛太麻煩了,所以現(xiàn)在一般不用。



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