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技術文章

ELISA實驗間接法試劑及試劑配制

閱讀:359          發(fā)布時間:2023-2-15

ELISA實驗間接法試劑及試劑配制:

1. 抗原及酶標記抗體
抗原: IgG

酶標抗抗體:羊抗鼠IgG-HRP

2.包被液(CBS):Na2CO3   0.8gNaHCO3  1.46g,水溶解,定容500ml。


3. 封閉液(3BSA+CBS 5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA。含5%荷蘭牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。

4. 洗滌液(PBST 10*):KH2PO4   4gNa2HPO4·12H2O    58g,NaCl   160g, KCl  4g,Tween-20 10mL  加水定容2L

5. 洗滌液(1*PBS): PBSTH2O=19


6. 底物溶液(4甲基酰苯氨)
①TMB
底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液):稱NaAc·3H2O1.13g,C6H8O7·H2O 1.05g,用蒸餾水溶解,定容至1000mL,調(diào)PH=3.6。
② TMB
底物液:稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜(DMSO)中,加60 mL 甲醇,混勻,加100mL 底物緩沖液,在暗處避光攪拌2小時至溶解,4℃避光保存。
③H2O2 
底物液:取140μL過氧化氫(H2O2)加入200mL底物緩沖液混勻。
底物應用液:現(xiàn)用現(xiàn)配,TMB:H2O2=1:1混勻。

7. 終止液:2mol/L H2SO4


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