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技術(shù)文章

豬ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程方法

閱讀:243          發(fā)布時(shí)間:2021-3-26

豬ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)流程:

1. 產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;

2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,37°C孵育1小時(shí);

3. 吸棄,加檢測(cè)溶液A100µL,37°C孵育1小時(shí);

4. 洗板3次;

5. 加檢測(cè)溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;

6. 洗板5次;

7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;

8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。

豬ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)開始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔加待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG工作液
100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見孔內(nèi)有明顯藍(lán)色,即可終止)。

5. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

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