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豬巨細(xì)胞病毒LAMP試劑盒檢測(cè)特異性與靈敏度
閱讀：327 發(fā)布時(shí)間：2021-1-12豬巨細(xì)胞病毒LAMP試劑盒檢測(cè)特異性與靈敏度:
高性能的UNICONTM Taq熱啟動(dòng)酶及組分優(yōu)化的反應(yīng)體系保證高度的特異性擴(kuò)增，提升了擴(kuò)增效率，使得UNICONTM qPCR Master Mix具有*的檢測(cè)靈敏度。以人293T細(xì)胞cDNA為模板，在相同條件下擴(kuò)增低拷貝hbcl6基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix具有更好的擴(kuò)增特異性、更高的擴(kuò)增效率及更好的復(fù)孔重復(fù)性，檢測(cè)靈敏度更高。
質(zhì)量檢測(cè)：
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下：
RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測(cè)得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測(cè)量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測(cè)
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。
2）變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS，pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。