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小鼠肝脂酶H?)酶聯(lián)免疫試劑盒※包被抗原
1.用50mM的碳酸鹽包被綬沖液(pH9.6)溶解抗原,使抗原濃度為10-20gml,加100u孔到96孔酶標(biāo)板,4C放置過(guò)夜。
2.第二天棄去包被液后,用PBST洗滌3次,每孔加入15019%BSA37C封閉1小時(shí)
次后,每孔加入100山不同倍比稀釋度的血清,并加入對(duì)照樣品,37孵育2小
4.PBST洗滌5次后,加入100?稀釋后的HRP標(biāo)記的二抗,37て孵育1小時(shí)。
5.PBST洗滌5次后,顯色劑顯色20min后,酶標(biāo)儀上讀取A405吸收值
※包被細(xì)胞
1.在96孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞數(shù)為1×104 cells/well,37C過(guò)夜培養(yǎng)。
2.第二天用PBS洗滌培養(yǎng)板2-3次。
3.加入125uWel10% Forma lin(110稀釋),室溫下固定15min
4.用dH20洗滌培養(yǎng)板3次,并晾干,儲(chǔ)藏在2-8C備用
5.用PBST洗滌3次,每孔加入150山1%BSA37C封閉1小
6.PBST洗滌3次后,每孔加入100山不同倍比稀釋度的血清,并加入對(duì)照樣品,37C孵育2小
7.PBST洗滌5次后,加入100山稀釋后的HRP標(biāo)記的二抗,37孵育1小時(shí)。
8.PBST洗滌5次后,顯色劑顯色20min后,酶標(biāo)儀上讀取A405吸收值。50mM的碳酸鹽包被緩沖液:0.05 mol/L PH9.6碳酸綬沖
液,4C,保存,Na2C030.15克, Nahco30.293克蒸餾水稀釋至100ml