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培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備

實(shí)驗(yàn)材料    胰蛋白酶細(xì)胞
試劑、試劑盒    EDTA·2NaPBS
儀器、耗材    離心管
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、培養(yǎng)細(xì)胞的特征

一般細(xì)胞培養(yǎng)分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)，由于細(xì)胞的增殖有可能形成大小不等的細(xì)胞團(tuán)塊或連接成片。如果兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞粘連在一塊或細(xì)胞碎片過多都將影響 FCM 結(jié)果，進(jìn)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。所以，制備合格的培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液十分重要。

二、培養(yǎng)細(xì)胞樣品的制備程序

1. 將培養(yǎng)細(xì)胞用 0.04% 乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA·2Na）或 0.29% 胰蛋白酶消化 3~7 min（根據(jù)室溫情況而定），至光鏡下見到貼壁細(xì)胞間出現(xiàn)篩狀間隙為止，棄去消化液，加 PBS 液。

2. 用吸管將細(xì)胞從瓶壁上輕輕吹打下來(lái)，并移入離心管中。

3. 短時(shí)低速離心，即 800~1000 r/min，5 min。

4. 棄上清，加 pH 7.4 的 PBS 液 5~8 ml，低速短時(shí)離心，800~1000 r/min 離心 3~5 min；重復(fù) 2~3 次，以去除細(xì)胞懸液中的細(xì)胞碎片。

5. 加少許 PBS 液，將沉淀細(xì)胞輕輕吹打均勻。加固定液或低溫保存待用。