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技術(shù)文章

微球數(shù)量太少?這三點(diǎn)一定要注意

閱讀:606          發(fā)布時(shí)間:2021-1-8

提及多因子的定量檢測(cè),越來(lái)越多的小伙伴會(huì)一個(gè)想到 Luminex 技術(shù)。Luminex 基于微球設(shè)計(jì)原理,可以在 1 張 96 孔板中定量檢測(cè)多達(dá) 100 種分析物,僅需少量樣本,節(jié)約時(shí)間、經(jīng)費(fèi),可謂一舉多得。

R&D Systems® 擁有 Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 兩個(gè)產(chǎn)品系列,均基于帶有顏色編碼的微球,這些微球表面包被了識(shí)別不同目標(biāo)分析物的特異性抗體。當(dāng)預(yù)包被的微球與待檢樣本孵育時(shí),分析物被微球捕獲,經(jīng)由生物素標(biāo)記的特異性檢測(cè)抗體混合物識(shí)別,加入鏈霉親和素 - PE 熒光素底物后發(fā)光并進(jìn)行定量檢測(cè)。

01  樣品粘稠,未有效稀釋
解決方法:測(cè)定前,如果是凍存的血清 / 血漿樣品,一步需將樣品充分解凍(如果樣本包含碎片的話也會(huì)影響數(shù)據(jù)的讀取)。建議在加樣前,將樣本進(jìn)行 16,000 x g 離心 4 分鐘,特殊情況下可能要離心更長(zhǎng)的時(shí)間,再用 Calibrator diluent 按照建議的稀釋比對(duì)樣本進(jìn)行稀釋。

02  進(jìn)樣針孔堵塞,進(jìn)樣針高度不正確
解決方法:以上兩種情況都會(huì)導(dǎo)致沒(méi)有充足的微球進(jìn)入,前者需用超聲的方法清洗針孔,如有需要進(jìn)行替換;后者需確定進(jìn)樣針的高度并調(diào)整至合適位置。

也可以進(jìn)入維護(hù)頁(yè)面,點(diǎn)擊 Cmds&Routines,使用 0.1 N NaOH 運(yùn)行深度清洗。

03  操作有誤,清洗步驟中孔板未附磁力架
解決方法:這是新手常常會(huì)出現(xiàn)的失誤。對(duì)于磁珠形式的微球,切記清洗時(shí)整個(gè)過(guò)程都要附有磁力架,確定磁力架正確地結(jié)合在微孔板上,洗板時(shí)磁力架應(yīng)置于微孔板底部,棄去洗滌液前應(yīng)靜置 1 分鐘。不要吸干,以防止磁珠丟失。

如果磁珠數(shù)量少,建議好不要用自動(dòng)洗板機(jī)清洗,我們發(fā)現(xiàn)自動(dòng)洗板機(jī)清洗可能會(huì)造成磁珠聚集,從而影響其數(shù)量。

?在實(shí)際的 Luminex 實(shí)驗(yàn)操作中,有客戶經(jīng)常碰到微球數(shù)少于 50 個(gè)甚至只有幾個(gè)的問(wèn)題,大地影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果,其可能的原因和解決方法有哪些呢?

 

如下為正確的手動(dòng)洗板方式:

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