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實(shí)驗(yàn)材料未分化 ES 細(xì)胞 
試劑、試劑盒PBS 
儀器、耗材ES 分化培養(yǎng)基 移液器 
實(shí)驗(yàn)步驟1. 準(zhǔn)備下列試劑和材料：

未分化 ES 細(xì)胞

無(wú) Ca2+ 和 Mg2+ PBS

ES 分化培養(yǎng)基

8 道微量移液器

無(wú)菌多道移液器容器

2. 收獲未分化 ES 細(xì)胞。

3. 在 100 mm 組織培養(yǎng)皿中加 10 ml PBS 備用。

4. 在一無(wú)菌容器內(nèi)將 5X104 未分化 ES 細(xì)胞懸浮于 5 ml ES 分化培養(yǎng)基中。

5. 用多道移液器在 100 mm 組織培養(yǎng)皿蓋的內(nèi)表面加 5 排 30 μl 液滴（每滴 300 個(gè)細(xì)胞）。

6. 拿起蓋，輕輕翻轉(zhuǎn)，蓋在內(nèi)有 10 ml PBS 的培養(yǎng)皿上。

7. 小心將培養(yǎng)皿放于溫箱內(nèi)，孵育 2 天。 

實(shí)驗(yàn)材料ES 細(xì)胞單一胚胎樣體 
儀器、耗材細(xì)菌培養(yǎng)皿 ES 分化培養(yǎng)基 
實(shí)驗(yàn)步驟1. 準(zhǔn)備下列試劑和材料：

懸滴培養(yǎng)的 ES 細(xì)胞單一胚胎樣體

100 mm 細(xì)菌培養(yǎng)皿

ES 分化培養(yǎng)基

2. 在 100 mm 細(xì)菌培養(yǎng)皿中加 10 ml 預(yù)熱的分化培養(yǎng)基。

3. 從溫箱中取出培養(yǎng) 2 天的懸滴培養(yǎng)物。小心翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿的蓋，用 10 ml 吸管收集內(nèi)表面上的懸滴。

4. ES 細(xì)胞集落轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中。

5. 單一胚胎樣體孵育 3 天。
 

實(shí)驗(yàn)材料單一胚胎樣體 
儀器、耗材組織培養(yǎng)板 巴斯德吸管 玻璃蓋玻片 無(wú)菌鑷子 ES 分化培養(yǎng)基 
實(shí)驗(yàn)步驟1. 準(zhǔn)備下列試劑和材料：

培養(yǎng)懸液中的單一胚胎樣體

6 孔組織培養(yǎng)板

帶棉塞巴斯德吸管

明膠包被的玻璃蓋玻片

無(wú)菌鑷子

ES 分化培養(yǎng)基

2. 準(zhǔn)備明膠包被的玻璃蓋玻片

3. 用無(wú)菌鑷子在 6 孔組織培養(yǎng)板的每孔中放一塊明膠包被的玻璃蓋玻片。

4. 在生物安全柜中取下培養(yǎng)板的蓋，紫外線下照射 3~5 分鐘，殺死可能污染的細(xì)菌。

5. 用帶棉塞巴斯德吸管把含有一個(gè)單一胚胎樣體的一小滴 ES 細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到蓋玻片中心。

6. 孵育 4~5 小時(shí)，使單一胚胎樣體附著于明膠表面。保持培養(yǎng)物濕潤(rùn)。

7. 吸附后，每孔中緩慢加入 2 ml 分化培養(yǎng)基（預(yù)熱至 37℃）。注意不要沖掉細(xì)胞。

8. 培養(yǎng)基變黃后換液，至少每周一次，加 2 ml 分化培養(yǎng)基。

9. 7 天內(nèi)可觀察到心肌細(xì)胞的自動(dòng)收縮。