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實(shí)驗(yàn)方法原理

SP（streptavidin-perosidase）法，即鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法。SP法是常使用的方法。

試劑、試劑盒 二甲苯酒精PBS雙氧水枸櫞酸緩沖液羊血清工作液辣根過(guò)氧化物酶鏈霉素卵白素蘇木素DAB

儀器、耗材 冰箱顯微鏡燒杯玻璃缸

實(shí)驗(yàn)步驟

1.  烤片：68℃，20 min。

 

2.  常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水：二甲苯I 20 min⇒二甲苯II 20 min⇒00%酒精10 min⇒100%酒精10 min⇒95%酒精5 min⇒80%酒精5 min⇒70%酒精5 min。

 

3.  阻斷滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10 min，PBS沖洗3X5 min。

 

4.  抗原修復(fù)：置0.01 M枸櫞酸緩沖液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15-20 min），自然冷卻20 min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5 min。

 

5.  正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗。

 

6.  滴加一抗4℃冰箱孵育過(guò)夜，PBS沖洗3X5 min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照）；滴加生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗3X5 min。

 

7.  滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS沖洗3X5 min。

 

8.  DAB/H2O2反應(yīng)染色，自來(lái)水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。