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試劑、試劑盒    酶溶液DRG
儀器、耗材    離心管培養(yǎng)皿解剖顯微鏡
實(shí)驗(yàn)步驟    
1. 解剖前在 15 ml 離心管中配制酶溶液，置 37℃ 水浴特用。

2. 解剖胚胎，解剖全過程保持組織濕潤。

(1) 殺死胚胎，去腿，放于 100 mm 培養(yǎng)皿。

(2) 用鈍頭剪刀沿腹中線作一切口，將皮膚向兩側(cè)卷縮至能取出內(nèi)臟。

(3) CMF-PBS 漂洗體腔。

(4) 用細(xì)鑷子或用 CMF-PBS 吹打，小心去掉脊柱上的任何黏附組織。

3. 在解剖顯微鏡下，用細(xì)鑷子從脊髓上細(xì)心撕下脊膜。取出交感神經(jīng)節(jié)，即 DRG 上脊髓兩側(cè)的細(xì)條帶。

4. 用微簧剪刀從神經(jīng)干上剪下神經(jīng)節(jié)，用細(xì)鑷子從脊髓上摘下 DRG，放于盛有 1 ml CMF-PBS 的 35 mm 培養(yǎng)皿。

5. 分離適量 DRG，確保無任何黏附組織或神經(jīng)干，時間以不超過 45 分鐘為宜。

6. 在預(yù)熱的酶溶液中加 1 ml 含 DRG 的 CMF-PBS。37℃ 水浴孵育 8 或 13 分鐘，每隔 3 分鐘顛倒一次管子。

7. 加入 1 ml FBS 終止酶反應(yīng)，沉淀 DRG。CMF-PBS 清洗 DRG，再沉淀。

8. DRG 懸于 1 ml 補(bǔ)給了 NGF 的*培養(yǎng)基（37℃）。用內(nèi)徑燒至一半的巴斯德吸管輕輕吹散細(xì)胞（6 次）。如果仍有組織塊殘留，使其沉降，細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至另一支 15 ml 無菌離心管。重復(fù)吹散殘留組織塊，兩次樣品混合。

9. 計(jì)數(shù)分散細(xì)胞，根據(jù)需要以合適密度接種。