Cayman的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）比色活性測(cè)定試劑盒提供了一種檢測(cè)血清、血漿、組織樣本和細(xì)胞裂解物中ALT活性的便捷方法。ALT活性的測(cè)量是通過(guò)監(jiān)測(cè)使用乳酸脫氫酶（LDH）的偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中NADH氧化的速率來(lái)進(jìn)行的。NADH氧化為NAD+的同時(shí)，340nm處的吸光度降低。在ALT活性是限速的情況下，速率下降與樣本中的ALT活性成正比。

需要但未提供：請(qǐng)下載試劑盒小冊(cè)子，以驗(yàn)證此檢測(cè)是否需要超純水（Milli-Q或同等產(chǎn)品）或任何其他成分。

警告：本品不適用于人類或獸醫(yī)。

測(cè)定方案：

艾美捷Cayman的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性分析試劑盒（#700260-96），提供了一種方便的方法，用于檢測(cè)血清、血漿、組織樣本和細(xì)胞裂解液中的ALT活性。通過(guò)監(jiān)測(cè)乳酸脫氫酶（LDH）耦聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中NADH氧化的速率來(lái)測(cè)量ALT活性。NADH氧化成NAD*伴隨著在340納米處吸光度的降低。在ALT活性成為速率限制步驟的情況下，速率的降低與樣本中的ALT活性直接成比例。

執(zhí)行測(cè)定：

1. 陽(yáng)性對(duì)照孔 - 在板中z定的孔中加入150μl的底物、20μl的輔因子和20μl的陽(yáng)性對(duì)照。

2. 樣本孔 - 在板中z定的孔中加入150μl的底物、20μl的輔因子和20μl的樣本。

3. 覆蓋板并在37℃下孵化15分鐘。

4. 移除板蓋，并迅速通過(guò)向所有使用的孔中加入20μl的ALT啟動(dòng)劑來(lái)啟動(dòng)反應(yīng)。

5. 立即在37℃下每分鐘測(cè)量一次340納米處的吸光度，持續(xù)10分鐘。如果ALT活性較低，繼續(xù)讀取長(zhǎng)達(dá)60分鐘。注意：背景孔（可選）- 在評(píng)估樣本中的ALT活性時(shí)，背景活性通常不重要。然而，如果需要，可以為每個(gè)樣本獲得背景值。對(duì)于每個(gè)正在測(cè)定的樣本，在板中z定的孔中加入150μl稀釋的測(cè)定緩沖液（不含ALT底物）、20μl的樣本、20μl的ALT輔因子和20μl的ALT啟動(dòng)劑。立即在37℃下每分鐘測(cè)量一次340納米處的吸光度，持續(xù)10分鐘。如果ALT活性較低，繼續(xù)讀取長(zhǎng)達(dá)60分鐘。

圖. 豬心丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶的活性