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β2微球蛋白ELISA試劑盒,血清血漿、尿液的檢測和計算

時間:2024/9/5閱讀:134
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Calbiotech-β2微球蛋白ELISA試劑盒用于定量測定人體血清中β-2微球蛋白(B2MG)的濃度。

 

艾美捷Calbiotech-β2微球蛋白ELISA試劑盒

目錄編號   BM010T

產(chǎn)品類型 ELISA

規(guī)格  96次測試(12x8易碎條狀井)

標準范圍 0.625-10 微克/毫升

分析靈敏度

0.625 微克/毫升

樣本體積 20 微升/

物種 人類

儲存和穩(wěn)定性 產(chǎn)品應(yīng)儲存在2-8°C。

注意事項 僅供研究使用。不用于診斷程序。

 

β2微球蛋白ELISA試劑盒檢測原理:

B2MG ELISA檢測基于固相酶聯(lián)免疫吸附試驗的原理。該檢測系統(tǒng)利用一種d特的單克隆抗體,針對完整的γ-2微球蛋白分子上的d特抗原決定簇。小鼠單克隆抗B2MG抗體用于固相固定(在微量孔上)。綿羊抗B2MG抗體存在于抗體-酶(辣根過氧化物酶)結(jié)合物溶液中。稀釋的測試樣品首先在37℃下與固定抗體反應(yīng)30分鐘。然后加入綿羊抗B2MG HRP偶聯(lián)物,并在37℃與固定抗原反應(yīng)30分鐘,使B2MG分子夾在固相和酶聯(lián)抗體之間。用水清洗這些孔以去除未結(jié)合的標記抗體。加入TMB試劑溶液,在室溫下孵育20分鐘,導致藍色出現(xiàn)。通過添加停止溶液停止顯色,將顏色變?yōu)辄S色。B2MG的濃度與測試樣品的顏色強度成正比。在450nm處用分光光度法測量吸光度。

 

血清和血漿檢測程序

1. 使用前需將患者血清、血漿和對照血清稀釋以獲得最佳結(jié)果。

準備一系列小管(如1.5毫升微量離心管),并將10 µl血清與1.0 ml樣本稀釋液混合(101倍稀釋)。標準品不需要稀釋,它們已經(jīng)預(yù)先稀釋了101倍。

2. 在架子上固定所需數(shù)量的包被孔。

3. 向相應(yīng)的孔中分配20 µl的標準品、稀釋樣本和稀釋對照品。

4. 向每個孔中分配200 µl的樣本稀釋液。

5. c底混合30秒鐘。w全混合非常重要。

6. 37°C下孵育30分鐘。

7. 通過將板內(nèi)內(nèi)容甩入廢物容器中移除孵育混合物。

8. 清除所有孔中的液體。用300 µl1X洗滌緩沖液沖洗孔三次。在吸收性紙巾或紙巾上拍干。

9. 用力在吸收性紙巾或紙巾上拍打孔以去除所有殘留的液體滴。

10. 向每個孔中分配200 µl的酶結(jié)合物試劑。輕輕混合10秒鐘。

11. 37°C下孵育30分鐘。

12. 按照步驟7、89中描述的方法移除內(nèi)容物并沖洗板。

13. 向每個孔中分配100 µlTMB試劑。

14. 輕輕混合10秒鐘。

15. 在室溫下暗處孵育20分鐘。

16. 通過向每個孔中添加100 µl的終止溶液來停止反應(yīng)。

17. 輕輕混合10秒鐘。確保所有的藍色w全變?yōu)辄S色非常重要。

18. 15分鐘內(nèi)使用微孔板讀取器讀取450nm處的吸光度。

 

血清和血漿結(jié)果計算

1. 計算每組參考標準、對照品和患者樣本的平均吸光度值(A450)。

2. 通過在圖表紙上繪制每個參考標準的平均吸光度與其濃度(以µg/ml為單位)的圖表,構(gòu)建標準曲線,吸光度值在垂直或Y軸上,濃度在水平或X軸上。

3. 使用每個樣本的平均吸光度值從標準曲線上確定相應(yīng)的B2MG濃度(以µg/ml為單位)。

 

尿液檢測程序

1. 尿液樣本需要用樣本稀釋液進行10倍稀釋(即50 µl尿液 + 450 µl樣本稀釋液)。

2. 從步驟2到步驟18,按照血清/血漿測試的相同檢測程序進行。

 

尿液檢測結(jié)果計算

1. 計算每組參考標準、對照品和患者樣本的平均吸光度值(A450)。

2. 通過在圖表紙上繪制每個參考標準的平均吸光度與其濃度(以µg/ml為單位)的圖表,構(gòu)建標準曲線,吸光度值在垂直或Y軸上,濃度在水平或X軸上。

3. 使用每個樣本的平均吸光度值從標準曲線上確定相應(yīng)的β2MG濃度(以µg/ml為單位)。將計算值除以10.1(由于β-2微球蛋白標準品已經(jīng)預(yù)先稀釋了101倍,因此從尿液樣本獲得的結(jié)果應(yīng)進一步除以10.1)。例如,如果從標準曲線計算出的一個尿液樣本的值為2.40 µg/ml;那么實際值將是2.40 µg/ml × 10.1 = 0.238 µg/ml。

 

Calbiotech-β2微球蛋白ELISA試劑盒標準曲線示例:

典型的標準運行結(jié)果,以450 nm處的吸光度讀數(shù)在Y軸上顯示,對應(yīng)于X軸上顯示的B2MG濃度。此標準曲線僅供示例,不應(yīng)用于計算未知數(shù)。每個用戶應(yīng)獲取自己的數(shù)據(jù)和標準曲線。

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艾美捷科技是Calbiotech的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。


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