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使用細胞株有哪些細節(jié)要注意
細胞株是科研工作中至關(guān)重要的工具，其正確使用對于實驗結(jié)果的準確性和可重復(fù)性具有關(guān)鍵意義。
細胞株的選擇是首要環(huán)節(jié)。要根據(jù)研究目的來挑選合適的細胞株。不同的細胞株具有不同的生物學(xué)特性，如腫瘤細胞株、正常細胞株、干細胞株等。如果是研究腫瘤發(fā)病機制，可能會選擇特定的腫瘤細胞株，如肺癌細胞株 A549、結(jié)直腸癌細胞株 SW620 等。這些細胞株應(yīng)具備明確的來源、背景信息和已驗證的生物學(xué)特性，可通過查閱相關(guān)文獻或咨詢專業(yè)的細胞庫獲取詳細信息。
細胞的復(fù)蘇是使用細胞株的重要起始步驟。從液氮罐中取出細胞凍存管后，要迅速放入 37℃的水浴中，不斷搖晃，確保凍存液快速融化。這個過程要控制在 1 - 2 分鐘內(nèi)，以減少室溫下融解過程對細胞的損傷。融化后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，輕輕吹打均勻，然后進行離心，去除凍存液中的 DMSO 等有害物質(zhì)。
培養(yǎng)條件的優(yōu)化對于細胞株的生長至關(guān)重要。溫度通常維持在 37℃，二氧化碳濃度保持在 5%左右，這是大多數(shù)哺乳動物細胞所需的環(huán)境條件。培養(yǎng)基的選擇也要根據(jù)細胞株的特點來確定，不同的細胞株對營養(yǎng)物質(zhì)、生長因子等的需求有所差異。例如，一些癌細胞株可能需要添加血清、胰島素、谷氨酰胺等特殊成分。
細胞的傳代也有一定技巧。當(dāng)細胞長到 80% - 90%匯合度時，需要進行傳代。首先棄去舊的培養(yǎng)基，用 PBS 清洗細胞以去除殘留的血清和雜質(zhì)。然后加入胰酶消化液，消化時間和溫度要嚴格控制，避免過度消化損傷細胞。當(dāng)細胞變圓、彼此分離時，加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細胞脫壁，按照適當(dāng)?shù)谋壤臃N到新的培養(yǎng)皿中。
細胞的凍存同樣不可忽視。當(dāng)細胞處于對數(shù)生長期時，可以進行凍存。凍存液一般由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清和 DMSO 按一定比例混合而成。將細胞與凍存液充分混合后，分裝到凍存管中，做好標記，包括細胞名稱、傳代次數(shù)、凍存日期等信息。然后將凍存管逐步降溫，先放入 4℃冰箱冷藏一段時間，再轉(zhuǎn)移到 - 80℃超低溫冰箱短期保存或液氮罐中長期保存。
在整個細胞株的使用過程中，嚴格的無菌操作是必須遵循的原則。使用前要對操作臺面、器械等進行消毒，操作過程中要注意防止微生物污染。同時，要定期對細胞進行檢查，觀察其形態(tài)、生長狀態(tài)等，確保細胞株沒有發(fā)生變異或被污染。只有這樣，才能充分發(fā)揮細胞株在科研中的作用，獲得可靠的實驗數(shù)據(jù)。