CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒技術(shù)詳解

時間：2025-6-18閱讀：176

CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒技術(shù)文章

（一）產(chǎn)品概述

CCK-8（Cell Counting Kit-8）細(xì)胞活力檢測試劑盒是一種基于 WST-8（水溶性四唑鹽）的高靈敏度、便捷的細(xì)胞活力檢測工具。試劑盒主要包含 CCK-8 溶液、細(xì)胞培養(yǎng)基、陽性對照品等組分。其中，CCK-8 溶液是核心試劑，WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，可被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原為水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物，該產(chǎn)物的生成量與活細(xì)胞數(shù)量成正比，通過測定其在特定波長下的吸光度，即可準(zhǔn)確反映細(xì)胞活力。

（二）技術(shù)原理

CCK-8 檢測的原理基于細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的活性。當(dāng) CCK-8 溶液加入到含有細(xì)胞的培養(yǎng)體系中時，WST-8 可穿透細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi)?；罴?xì)胞中的線粒體脫氫酶能夠?qū)?WST-8 還原為橙黃色的甲臜，而死細(xì)胞由于缺乏活性的脫氫酶，無法進行該還原反應(yīng)。在 450nm 波長處測定甲臜產(chǎn)物的吸光度，其吸光度值與活細(xì)胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系。通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可根據(jù)吸光度值準(zhǔn)確計算出細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)量。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比，CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好，無需裂解細(xì)胞，避免了操作過程中因細(xì)胞裂解不等因素導(dǎo)致的誤差，使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、穩(wěn)定。

（三）應(yīng)用領(lǐng)域與實際案例

藥物研發(fā)：在新藥篩選和藥物毒性評估中，CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用。例如，在抗腫瘤藥物研發(fā)過程中，科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細(xì)胞系，一定時間后加入 CCK-8 溶液檢測細(xì)胞活力。通過計算藥物對細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50），評估藥物的抗腫瘤活性和毒性，為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持，篩選出具有潛力的候選藥物。

細(xì)胞生物學(xué)研究：在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等基礎(chǔ)細(xì)胞生物學(xué)研究中，該試劑盒用于實時監(jiān)測細(xì)胞狀態(tài)。如在干細(xì)胞分化研究中，使用 CCK-8 檢測不同誘導(dǎo)條件下干細(xì)胞的活力變化，判斷細(xì)胞是否成功分化以及分化過程中細(xì)胞活力的動態(tài)變化，為揭示細(xì)胞分化機制提供依據(jù) 。

毒理學(xué)研究：在評估化學(xué)物質(zhì)、環(huán)境污染物等對細(xì)胞的毒性作用時，CCK-8 法是常用的檢測手段。例如，檢測重金屬離子對肝細(xì)胞的毒性，將肝細(xì)胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中，利用 CCK-8 試劑盒檢測細(xì)胞活力，確定重金屬的毒性劑量和作用機制，為環(huán)境安全評估和毒理學(xué)研究提供數(shù)據(jù)。

（四）使用方法與注意事項

使用方法

細(xì)胞接種：將對數(shù)生長期的細(xì)胞消化后，用培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度，接種到 96 孔板中，每孔加入適量細(xì)胞懸液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

藥物處理（如需）：根據(jù)實驗?zāi)康?，向孔中加入不同濃度的藥物或處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間。

CCK-8 檢測：向每孔加入適量 CCK-8 溶液，輕輕混勻后，將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時（具體時間根據(jù)細(xì)胞類型和實驗條件確定）。

吸光度測定：使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)量。

注意事項

試劑儲存：CCK-8 試劑盒應(yīng)避光保存于 4℃冰箱，避免反復(fù)凍融，否則會影響試劑活性。

操作規(guī)范：實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免污染。加入 CCK-8 溶液時，避免產(chǎn)生氣泡，以免影響吸光度測定。

干擾因素：某些具有還原性的物質(zhì)可能會與 WST-8 發(fā)生反應(yīng)，影響檢測結(jié)果，實驗前需評估樣品中是否存在此類干擾物質(zhì)，并進行相應(yīng)處理。

對照設(shè)置：實驗中應(yīng)設(shè)置空白對照（只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液）、陰性對照（正常培養(yǎng)的細(xì)胞）和陽性對照（已知具有細(xì)胞毒性或促進細(xì)胞生長作用的物質(zhì)處理的細(xì)胞），確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

CCK-8 細(xì)胞活力檢測試劑盒憑借其操作簡便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢，在生物技術(shù)多個領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，其應(yīng)用場景將進一步拓展，同時也將推動相關(guān)技術(shù)的持續(xù)創(chuàng)新和優(yōu)化。

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