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會影響 Qubit RNA IQ Assay Kit 實驗準確性的常見問題:

時間:2025-6-13閱讀:1131
會影響 Qubit RNA IQ Assay Kit 實驗準確性的常見問題:


  • 樣本方面

    • RNA 降解:樣本保存不當,如未及時低溫保存或反復凍融,會使 RNA 發(fā)生降解。降解的 RNA 會導致 RIN 值降低,影響實驗準確性,因為 Qubit RNA IQ Assay Kit 是基于完整 RNA 的熒光信號來評估其質(zhì)量和濃度的。

    • 樣本污染:實驗過程中,如果使用了被 RNase 污染的耗材、試劑或?qū)嶒灜h(huán)境,會導致 RNA 被降解或產(chǎn)生假陽性結(jié)果。此外,樣本中存在的蛋白質(zhì)、鹽離子、有機溶劑等雜質(zhì)也會干擾熒光染料與 RNA 的結(jié)合,影響檢測準確性。

    • 樣本濃度過高或過低:樣本濃度超出試劑盒的檢測范圍,過高會使熒光信號飽和,無法準確測量;過低則會導致熒光信號微弱,誤差增大。

  • 試劑方面

    • 試劑過期或變質(zhì):試劑盒中的試劑都有一定的保質(zhì)期,過期或保存條件不當導致試劑變質(zhì),會使熒光染料的性能發(fā)生改變,無法與 RNA 正常結(jié)合,從而影響檢測結(jié)果的準確性。

    • 試劑混合不均勻:在將 Qubit RNA IQ 染料與樣本混合時,如果沒有充分混勻,會導致染料與 RNA 結(jié)合不充分,熒光信號不穩(wěn)定,影響濃度和質(zhì)量指標的準確性。

  • 儀器方面

    • 儀器未校準:Qubit 儀器若未定期校準,其光學系統(tǒng)、熒光檢測模塊等可能出現(xiàn)偏差,導致檢測結(jié)果不準確。例如,儀器的波長準確性發(fā)生偏移,會使熒光信號的檢測出現(xiàn)誤差。

    • 儀器故障:儀器的部件故障,如光源老化、檢測器故障等,會影響熒光信號的正常檢測。光源老化會使激發(fā)光強度不足,導致熒光信號減弱,進而影響測量結(jié)果。

  • 操作方面

    • 加樣不準確:使用移液器加樣時,如果操作不規(guī)范,如吸液速度過快、移液器量程選擇不當、吸頭內(nèi)有氣泡等,會導致加入的樣本或試劑體積不準確,影響實驗結(jié)果。

    • 孵育時間和溫度不當:染料與 RNA 的結(jié)合需要一定的孵育時間和合適的溫度條件。孵育時間過短或過長、溫度過高或過低,都會影響染料與 RNA 的結(jié)合效率,從而影響檢測結(jié)果的準確性。

    • 檢測環(huán)境不穩(wěn)定:實驗環(huán)境的溫度、濕度、光照等條件不穩(wěn)定,可能會對熒光信號產(chǎn)生影響。例如,溫度變化較大時,熒光染料的熒光量子產(chǎn)率可能會發(fā)生改變,導致檢測結(jié)果不準確。



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