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樣品處理不當(dāng)會對電泳結(jié)果產(chǎn)生哪些影響?

時間:2025-5-22閱讀:261
樣品處理不當(dāng)會在多個方面對電泳結(jié)果產(chǎn)生影響,具體如下:


  • 條帶形狀異常

    • 拖尾:若樣品濃度過高,會使蛋白質(zhì)或核酸分子在凝膠中移動時相互干擾,導(dǎo)致條帶拖尾。另外,樣品溶解不充分,存在未溶解的顆粒,也會造成條帶拖尾,因為這些顆粒會在電泳過程中不規(guī)則移動,影響條帶的形狀。

    • 扭曲變形:處理樣品時若局部受熱或 pH 值不均勻,會使生物大分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而在電場中的遷移行為異常,導(dǎo)致條帶扭曲變形。例如,在蛋白質(zhì)電泳中,若加入的 SDS 不均勻,會使蛋白質(zhì)分子結(jié)合的 SDS 量不同,導(dǎo)致其帶電情況和構(gòu)象變化不一致,進而使條帶變形。

  • 條帶分辨率降低

    • 樣品未充分分離:如果在樣品處理過程中,沒有使蛋白質(zhì)或核酸充分變性或解聚,那么它們可能會以多聚體或復(fù)合物的形式存在,在電泳時無法按照各自的分子量大小進行有效分離,使得條帶分辨率降低,相鄰條帶難以區(qū)分。

    • 擴散現(xiàn)象嚴重:樣品處理后若未及時進行電泳,或在電泳過程中樣品槽中的樣品泄漏,都會導(dǎo)致樣品在凝膠中擴散,使條帶變寬,分辨率下降。例如,核酸樣品在加樣前若在室溫下放置時間過長,其在溶液中的擴散會使加樣后形成的條帶變模糊。

  • 條帶缺失或信號減弱

    • 樣品降解:在樣品收集、保存或處理過程中,若受到核酸酶、蛋白酶等的作用,會導(dǎo)致核酸或蛋白質(zhì)降解。例如,在提取 RNA 時,若實驗環(huán)境中存在 RNA 酶,會使 RNA 被降解,在電泳結(jié)果中表現(xiàn)為條帶缺失或信號減弱。

    • 樣品損失:在樣品處理的各個環(huán)節(jié),如轉(zhuǎn)移、離心等過程中,若操作不當(dāng),可能會導(dǎo)致樣品的丟失。例如,在吸取樣品時,移液器操作不準確,可能會少吸取部分樣品,或者在離心過程中,離心管破裂導(dǎo)致樣品損失,最終使電泳條帶信號減弱甚至缺失。

  • 非特異性條帶出現(xiàn)

    • 雜質(zhì)干擾:處理樣品時,如果混入了其他雜質(zhì),如在細胞裂解過程中未去除干凈的細胞碎片、培養(yǎng)基成分等,這些雜質(zhì)可能會在電泳過程中與目標生物大分子一起遷移,形成非特異性條帶,干擾對結(jié)果的分析。

    • 化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生異常產(chǎn)物:樣品處理過程中,若發(fā)生了一些非預(yù)期的化學(xué)反應(yīng),如蛋白質(zhì)的氧化、糖基化等,可能會產(chǎn)生一些修飾后的蛋白質(zhì)產(chǎn)物,它們在電泳中會形成額外的條帶,影響對正常條帶的判斷。



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