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高效液相色譜的固定相和流動相概述

閱讀:1027        發(fā)布時間:2021-03-06
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高效液相色譜法具有高柱效、高選擇性、分析速度快、靈敏度高、重復性好、應用范圍廣等優(yōu)點。該法已成為現代分析技術的重要手段之一,目前在化學、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保、農業(yè)等科學領域獲得廣泛的應用。

 

和氣相色譜一樣,液相色譜分離系統(tǒng)也由兩相——固定相和流動相組成。

一、固定相
高效液相色譜固定相以承受高壓能力來分類,可分為剛性固體和硬膠兩大類。

 

剛性固體以二氧化硅為基質,可承受7.0×108~1.0×109Pa的高壓,可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒。如果在二氧化硅表面鍵合各種官能團,可擴大應用范圍,它是目前z`ui廣泛使用的一種固定相。

 

硬膠主要用于離子交換和尺寸排阻色譜中,它由聚苯乙烯與二乙烯苯基交聯而成??沙惺軌毫ι舷逓?.5×10Pa。固定相按孔隙深度分類,可分為表面多孔型和全多孔型固定相兩類。

 

1.表面多孔型固定相
它的基體是實心玻璃球,在玻璃球外面覆蓋一層多孔活性材料,如硅膠、氧化硅、離子交換劑、分子篩、聚酰胺等。這類固定相的多孔層厚度小、孔淺,相對死體積小,出峰迅速、柱效亦高;顆粒較大,滲透性好,裝柱容易,梯度淋洗時能迅速達到平衡,較適合做常規(guī)分析。由于多孔層厚度薄,大允許量受到限制。

 

2.全多孔型固定相
由直徑為10nm的硅膠微粒凝聚而成。這類固定相由于顆粒很細(5~10um),孔仍然較淺,傳質速率快,易實現高效、高速。特別適合復雜混合物分離及痕量分析。

 

 

 

二、流動相
由于高效液相色譜中流動相是液體,它對組分有親合并參與固定相對組分的競爭,因此,正確選擇流動相直接影響組分的分離度。對流動相溶劑的要求是:
(1)溶劑對于待測樣品,必須具有合適的極性和良好的選擇性。
(2)溶劑與檢測器匹配。對于紫外吸收檢測器,應注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長要長。所謂溶劑的紫外截止波長指當小于截止波長的輻射通過溶劑時,溶劑對此輻射產生強烈吸收,此時溶劑被看作是光學不透明的,它嚴重干擾組分的吸收測量。對于折光率檢測器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相,以達到z`ui靈敏度。
(3)高純度
由于高效液相色譜靈敏度高,對流動相溶劑的純度也要求高。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn),或產生“偽峰”。
(4)化學穩(wěn)定性好
(5)低粘度(粘度適中)若使用高粘度溶劑,勢必增高壓力,不利于分離。常用的低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等;但粘度過低的溶劑也不宜采用,例如戊烷和yi醚等,它們容易在色譜柱或檢測器內形成氣泡,影響分離。

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