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穿梭箱實驗在小鼠主動回避學(xué)習(xí)中的作用
目前，對于該腦區(qū)在主動回避學(xué)習(xí)中的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未*明確。目的：探索中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)氨基丁酸(y-Aminobutyricacid，GABA)能神經(jīng)元在主動回避學(xué)習(xí)中的調(diào)控作用。方法：通過穿梭箱實驗，對實驗小鼠進(jìn)行主動回避訓(xùn)練；通過早期即刻基因c-fos免yi熒光染色確定小鼠PAG內(nèi)c-fos表達(dá)的變化；利用腦立體定位注射，將攜帶有hM3Dq或hM4Di基因的重組腺相關(guān)病毒定位注射于Vgat-cre轉(zhuǎn)基因小鼠的PAG內(nèi)，待2-3周后GABA能神經(jīng)元穩(wěn)定表達(dá)hM3Dq或hM4Di。制備300|im厚度的PAG離體腦片，進(jìn)行全細(xì)胞膜片鉗記錄，記錄CNO對GABA能神經(jīng)元活動的調(diào)節(jié)。應(yīng)用化學(xué)遺傳學(xué)技術(shù)，在清醒小鼠體內(nèi)特異性激活或者抑制PAG的GABA能神經(jīng)元，觀察改變GABA能神經(jīng)元的活動對小鼠主動回避學(xué)習(xí)能力的影響；結(jié)果：Vgat-ChR2-EYFP轉(zhuǎn)基因小鼠在主動回避學(xué)習(xí)中存在延遲建立的特性；主動回避學(xué)習(xí)中，與正常小鼠相比，建立遲緩的小鼠PAG內(nèi)GABA能神經(jīng)元激活的數(shù)量增多；PAG內(nèi)表達(dá)hM3Dq的GABA能神經(jīng)元被其配體**氯氮平-N-氧化物(Clozapine-N-oxide，CNO)特異性激活，動作電位發(fā)放頻率增加，表達(dá)hM4Di的GABA能神經(jīng)元被CNO特異性抑制，神經(jīng)元動作電位的發(fā)放頻率降低；在主動回避學(xué)習(xí)過程中，使用CNO特異性激活PAG的GABA能神經(jīng)元可以延緩主動回避學(xué)習(xí)過程，使用CNO特異性抑制PAG的GABA
能神經(jīng)元并不影響主動回避行為的建立。結(jié)論：Vgat-ChR2-EYFP轉(zhuǎn)基因小鼠存在主動回避學(xué)習(xí)障礙，PAG的GABA能神經(jīng)元調(diào)節(jié)主動回避行為的建立，激活PAG的GABA能神經(jīng)元可以起到延緩主動回避行為建立的作用。