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進(jìn)口電泳儀的電泳遷移率受何因素影響？
進(jìn)口電泳儀的電泳遷移率受何因素影響？
進(jìn)口電泳儀又稱毛細(xì)管電泳，是一種新型液相分離分析技術(shù)，以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場產(chǎn)生的電滲流為驅(qū)動力，根據(jù)試樣中各組分之間電泳淌度和分配行為的差異實現(xiàn)分離。
進(jìn)口電泳儀進(jìn)行實驗室哪些因素會影響電泳遷移率呢？
DNA分子大小遷移速率與logN成反比（N為堿基對數(shù)目）。分子越大，摩擦阻力越大，同時大分子通過凝膠孔徑的效率也低于較小的分子，所以分子大的遷移慢。等量的空間結(jié)構(gòu)，緊密的電泳快（超螺旋＞線性DNA）一般來說，分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快。
濃度越大，分子孔徑就越小，DNA遷移速率就越低，反之，遷移速率就大。另外，濃度也跟凝膠的分辨率有關(guān)，濃度越大，分辨率越高，但分離的DNA片段就越小。
一般遷移速率超螺旋環(huán)狀＞線狀DNA＞單鏈開環(huán)。低電壓時，線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。包括標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖和低熔點瓊脂糖以及正在研制的介于二者之間的瓊脂糖。其分辨率等各有不同。
溶液pH值距離其等電點愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大，尤其對于蛋白質(zhì)等兩性分子，緩沖液pH還會影響到其電泳方向;溶液的離子強度過低，會使電導(dǎo)率降低，DNA不是全然不動就是遷移極慢；而離子過強時，電導(dǎo)率上升，會產(chǎn)生大量熱能，使凝膠變化甚至熔化，也會使DNA變性。
染色劑溴化乙錠插入雙鏈DNA造成其負(fù)電荷減少、剛性和長度增加，因此，線性DNA-染料復(fù)合物在凝膠中的遷移率降低。
研究結(jié)果表明：
在低濃度、低電壓下，分離效果較好。在低電壓條件下，線性DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比。但是，在電場強度增加時，較大的DNA片段遷移率的增加相對較小。因此隨著電壓的增高，電泳分辨率反而下降，為了獲得電泳分離DNA片段的大分辨率，電場強度不宜高于15V/cm。一般在5-10v之間。電泳系統(tǒng)的溫度對于DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳行為沒有顯著的影響。通常在室溫下進(jìn)行電泳，只有當(dāng)凝膠濃度低于0.5%時，為增加凝膠硬度，可在4℃，進(jìn)行電泳。