美國Biozellen-3D細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒產(chǎn)品

產(chǎn)品基本信息

本公司今日報道：

• 中文名稱：3D細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒

• 英文名稱：3D cell culture Kit

• 貨號：KC7186

• 保存條件：室溫

產(chǎn)品概述

本3D細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒所包含的生物活性凝膠，能夠高度模擬活體內(nèi)三維組織的微環(huán)境與形態(tài)結(jié)構(gòu)。它為細(xì)胞的體外培養(yǎng)以及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了近似于體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的三維立體微環(huán)境，有力支持各種細(xì)胞的三維生長。

該凝膠的主要成分是多糖和人工多肽，具有諸多顯著優(yōu)勢。其不含抗原物質(zhì)和動物源性成分，從根本上杜絕了免疫原性的風(fēng)險。產(chǎn)品成分穩(wěn)定且明確，批次間差異極小，這使得實(shí)驗(yàn)具有ji高的可重復(fù)性。

在操作方面，本產(chǎn)品極為簡便。僅需在室溫下操作，無需像其他產(chǎn)品那樣在冰上進(jìn)行復(fù)雜的處理。而且，它可以直接使用，無需進(jìn)行稀釋或額外添加其他成分。僅需簡單的2個步驟，經(jīng)過5-10分鐘的孵育，即可成功形成細(xì)胞-凝膠的三維結(jié)構(gòu)。

此外，該凝膠對剪切力敏感，能夠直接進(jìn)行體內(nèi)原位注射，無論是與細(xì)胞混合還是不混合的情況下，都能無縫對接體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，為開展動物實(shí)驗(yàn)提供了極大的便利。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，還可回收培養(yǎng)。試劑盒附贈溫和裂解液，裂解或降解后的成分僅為單糖和氨基酸，對細(xì)胞無任何不良影響。

從觀察角度來看，該凝膠具有高透光性和高通透性的特點(diǎn)，方便研究人員通過熒光觀察、顯色觀察等多種方式對細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時跟蹤觀察。

操作說明書

1. 預(yù)熱凝膠液：使用前，將凝膠液預(yù)熱至37℃，為后續(xù)與細(xì)胞懸液的混合做好準(zhǔn)備。

2. 混合凝膠液與細(xì)胞懸液：在離心管中，將凝膠液和細(xì)胞懸液輕輕混勻?？奢p柔快速地進(jìn)行斡旋操作，時間控制在1分鐘內(nèi)，重復(fù)1-2次。特別注意，在凝膠和細(xì)胞混合時，必須嚴(yán)格按照說明書的要求，先吸取凝膠，再往凝膠中加入細(xì)胞懸液，然后進(jìn)行混勻，順序絕對不可顛倒。同時，斡旋時間不能超過1分鐘，斡旋次數(shù)不能超過3次，因?yàn)檫^度斡旋會破壞細(xì)胞膜，并增加凝膠中的氣泡，從而嚴(yán)重影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。建議的終細(xì)胞濃度為4.2x10^5/ml-1x10^6/ml。不同的培養(yǎng)體系可參照以下表格確定各成分的體積：
        |孔板類型|凝膠液體積|細(xì)胞懸液體積|培養(yǎng)基體積|
        | ---- | ---- | ---- | ---- |
        | 96孔板| 30ul /孔| 30ul /孔| 80ul /孔|
        | 24孔板| 150ul /孔| 150ul /孔| 400ul /孔|
        | 12孔板| 300ul /孔| 300ul /孔| 800ul /孔|
        | 6孔板| 600ul /孔| 600ul /孔| 1600ul /孔|

3. 潤洗與鋪展：用1xpbs潤洗細(xì)胞培養(yǎng)板，建議至少在凝膠形成前20分鐘進(jìn)行潤洗操作。潤洗后，快速將凝膠細(xì)胞混合物貼壁加入培養(yǎng)板中，并在四周輕輕晃動培養(yǎng)板，使凝膠細(xì)胞混合物均勻鋪展。

4. 凝膠形成：將培養(yǎng)板置于37℃環(huán)境下孵育5-30分鐘，以形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

5. 添加培養(yǎng)液與培養(yǎng)：孵育完成后，沿孔壁緩慢加入培養(yǎng)液。隨后，將培養(yǎng)板置于37℃、5% CO2的條件下培養(yǎng)24小時。在此期間，應(yīng)避免晃動培養(yǎng)板，以免破壞凝膠結(jié)構(gòu)。

6. 換液操作：24小時后進(jìn)行半換液操作，即用移液槍輕輕吸取上層細(xì)胞培養(yǎng)液的1/2，再添加等量的新鮮培養(yǎng)液。此后，可根據(jù)細(xì)胞的生長情況進(jìn)行正常換液。特別注意，換液時一定要緊貼培養(yǎng)孔壁，小心吸取，避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題及解決方法

1. 氣泡問題：若在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)氣泡，可將凝膠放置在4℃冰箱中，氣泡可自行消除。如需快速消除氣泡，可采用微波加熱30s的方法。為避免在使用過程中產(chǎn)生氣泡，建議使用1mL無菌注射器（去針頭使用）輕吸凝膠注入EP管中，也可以使用經(jīng)PBS潤洗的1mL槍頭吸取凝膠，再將細(xì)胞懸液加入后上下輕輕吹打進(jìn)行混勻。

2. 細(xì)胞適應(yīng)問題：對于2D培養(yǎng)的細(xì)胞接種到凝膠中，通常需要2-4天的時間來適應(yīng)凝膠的三維環(huán)境。在這期間，細(xì)胞的生長狀態(tài)可能會比較保守，多呈圓形。之后，細(xì)胞會逐漸恢復(fù)正常生長，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3. 細(xì)胞遷移問題：為避免一些類型的細(xì)胞從凝膠中遷移到培養(yǎng)皿底部貼壁，在鋪板前，可先將孔板包被一層薄薄的凝膠。具體方法是將凝膠和培養(yǎng)液按照1:1的體積比配置，鋪在孔板底部，待其凝固之后，再鋪凝膠細(xì)胞混合液。

細(xì)胞收集與再培養(yǎng)

1. 回收凝膠中的細(xì)胞：棄掉培養(yǎng)液，并用裂解液沖洗培養(yǎng)孔板。加入凝膠液5倍體積的裂解液，輕輕吹打數(shù)次，在室溫下裂解約10分鐘，使凝膠wan全變成液體狀態(tài)。將混合液收集到離心管中，用PBS沖洗孔板，并將沖洗液也收集至上述離心管中。然后，以1500 rpm的轉(zhuǎn)速離心3分鐘，即可收集到細(xì)胞。如果細(xì)胞在凝膠內(nèi)是成團(tuán)生長的，可以在裂解時適當(dāng)加大裂解液體積，并延長裂解時間，以得到分散的單個細(xì)胞。

問題集

1. 3D細(xì)胞培養(yǎng)后如何染色？
        答：3D細(xì)胞培養(yǎng)后可以直接在膠中進(jìn)行染色，染色步驟與2D培養(yǎng)的細(xì)胞相同，不需要進(jìn)行特殊處理。

2. 3D細(xì)胞培養(yǎng)后怎么觀察？
        答：3D細(xì)胞培養(yǎng)后可以使用Confocal或者熒光倒置顯微鏡進(jìn)行觀察，光學(xué)顯微鏡也可以觀察，但是由于凝膠是立體結(jié)構(gòu)，可能光學(xué)顯微鏡觀察的效果不會太理想。

3. 你們的3D細(xì)胞培養(yǎng)凝膠能進(jìn)行培養(yǎng)嗎？
        答：可以。

4. 你們的3D細(xì)胞培養(yǎng)凝膠使用時需要使用配套的專用耗材或者儀器嗎？
        答：不需要使用專用耗材和儀器。采用本試劑盒進(jìn)行3D細(xì)胞培養(yǎng)時所用的耗材和儀器同2D培養(yǎng)。

5. 你們的3D細(xì)胞培養(yǎng)凝膠試劑盒可以用于細(xì)胞共培養(yǎng)嗎？
        答：可以進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)。

6. 你們的3D培養(yǎng)凝膠試劑盒是不是只能培養(yǎng)特定的一些細(xì)胞？
        答：本試劑盒對細(xì)胞沒有選擇性，對大多數(shù)細(xì)胞都是適用的。

7. 你們的3D培養(yǎng)凝膠試劑盒和Matrigel基質(zhì)膠有何不同？
        答：Matrigel基質(zhì)膠主要是由層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白等組成，是從腫瘤中提取出來的，成分復(fù)雜。本試劑盒凝膠主要是由多肽和多糖構(gòu)成，為全人工合成的，無動物源性。適用Matrigel基質(zhì)膠進(jìn)行3D培養(yǎng)，其后期染色非常困難，細(xì)胞也無法回收。使用本試劑盒進(jìn)行3D培養(yǎng)后的細(xì)胞可以輕松染色，并可以在保持細(xì)胞活性的情況下回收細(xì)胞，是您3D培養(yǎng)的理想選擇。

8. 你們的3D培養(yǎng)凝膠和軟瓊脂一樣嗎？
        答：我們的3D培養(yǎng)凝膠是人工合成的，其性能大大優(yōu)于軟瓊脂。

9. 凝膠和細(xì)胞懸液混合這一步，是否有順序要求？
        答：有。必須嚴(yán)格按照說明書，先吸取凝膠到容器中，再往凝膠中加入細(xì)胞懸液，混勻。順序不可顛倒。否則不利于形成穩(wěn)定的凝膠結(jié)構(gòu)。

10. 使用中如何吸取凝膠？
         答：先將槍頭jian端剪掉，用PBS潤洗，然后再吸取凝膠。慢慢松開移液槍的按鈕，按鈕彈回原位之后，讓槍頭在凝膠液面以下稍多停留一會兒，再提槍，轉(zhuǎn)移凝膠到其他容器中。

11. 吸取凝膠與混勻凝膠過程中，產(chǎn)生的氣泡可否消除？
         答：吸取與混勻凝膠過程中產(chǎn)生的氣泡不能消除，會影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，所以，應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生。

12. 怎樣達(dá)到更好的鋪板效果？
         答：鋪板前，采用分區(qū)域逐滴滴加的方式，把每一滴凝膠按一定排布次序滴在孔（或皿）的不同區(qū)域，滴好之后，用槍頭在凝膠表面輕輕引流，可獲得較為均勻的鋪板結(jié)果。鋪板后將培養(yǎng)板靜置孵育5-30min，期間不要晃動培養(yǎng)板。

13. 何時添加培養(yǎng)液？
         答：37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育5-30min形成穩(wěn)定凝膠結(jié)構(gòu)后即需要添加培養(yǎng)液。將培養(yǎng)液貼壁緩慢加入孔板中。

14. 培養(yǎng)過程中需要如何換液？
         答：換液時注意先將負(fù)壓泵壓力調(diào)低。在培養(yǎng)48小時之后再進(jìn)行換液。換液時，棄掉2/3左右的舊液即可，留少量舊液以避免吸走凝膠；對于生長快的細(xì)胞，24h時可以換掉一半培養(yǎng)液。換液時一定要緊貼培養(yǎng)孔壁，小心緩慢吸取舊液，避免吸掉剛貼附好的細(xì)胞。添加新液一定要貼壁、緩慢加入，以避免沖壞凝膠。此后可根據(jù)細(xì)胞生長速度，視培養(yǎng)液的消耗情況來換液。