間充質干細胞（MSC）無血清基礎培養(yǎng)基（含酚紅）

貨號：B01096

規(guī)格：500mL 

產(chǎn)品概述

間充質干細胞（MSC）無血清基礎培養(yǎng)基是根據(jù)UltraGRO™-Advanced添加劑適配的一款化學成分明確、無異種動物源成分的培養(yǎng)基。各種營養(yǎng)成分相互搭配特別適合用于人間充質干細胞（包括臍帶，脂肪，骨髓等來源）的無血清條件下原代分離及傳代培養(yǎng)，具備保持間充質干細胞的多項分化潛能及維持其良好的增殖速率的特性。

產(chǎn)品特點

?無動物源、無蛋白、wan全化學成分限定的培養(yǎng)基

?適應多種人間充質干細胞，包括臍帶，脂肪，骨髓等來源

?GMP生產(chǎn)，全進口原料，批間差異小

?無需包被培養(yǎng)板，可用于原代細胞分離及傳代

?經(jīng)過低內(nèi)毒素和微生物檢測

產(chǎn)品詳情

使用說明

間充質干細胞（MSC）wan全培養(yǎng)基配制

將UltraGRO™-Advanced添加劑（貨號HPCFDCRL50）在37℃水浴wan全融化，按體積1:19加入到間充質干細胞（MSC）無血清基礎培養(yǎng)基中，輕輕混合均勻，即為間充質干細胞wan全培養(yǎng)基。

注：原代分離推薦使用青霉素-鏈霉素溶液（貨號B03002），其他代次不推薦使用。

原代間充質干細胞分離

1、 手術臺上取正常剖宮產(chǎn)健康新生兒臍帶，浸泡于含青霉素-鏈霉素溶液的wan全培養(yǎng)基中，4℃保存。

2、超凈臺內(nèi)取出臍帶，用DPBS（貨號B02001）洗去臍帶殘留血液，剪成3-4cm小段。

3、用DPBS清洗一次，用組織鑷去除臍帶中的2條臍動脈。

4、 沿臍靜脈將臍帶剪開，用組織鑷刮去靜脈，留下華通氏膠（Whalton’s Jelly）。

5、 將已除去臍動靜脈的臍帶，放入DPBS中清洗2-3次，剪成1.5mm左右大小。

6、 將剪好的臍帶均勻鋪于培養(yǎng)皿或T75培養(yǎng)瓶中，間隔5mm左右。

7、 靜置5-10分鐘后，加入wan全培養(yǎng)基，放置于二氧化碳培養(yǎng)箱中（條件為5%CO₂、37℃）。

8、 培養(yǎng)3天后，鏡下觀察有無細菌污染，進行半量換液。

9、 細胞培養(yǎng)至7-10天可見長梭形細胞從組織塊內(nèi)爬出，7天進行全換液。

10、培養(yǎng)至12-15天可見大量細胞爬出，此時爬出的細胞記為P0。

11、待組織塊周邊細胞密度達到80%-90%左右時，0.25%胰酶消化液（貨號B03003或B03001）消化細胞進行傳代。并記為P1，以此類推。

間充質干細胞傳代

1、待細胞融和度達到約80-90%進行傳代（注：細胞不能太密集，否則容易分化），吸棄培養(yǎng)皿或瓶中培養(yǎng)基。

2、加適量DPBS輕輕沖洗1次。

3、加入0.25%胰酶消化液，室溫作用。

4、顯微鏡下觀察細胞wan全脫落后，用移液器輕輕吹打細胞，使細胞wan全脫落。

5、若使用B03001胰酶消化液，500g離心10min。若使用B03003胰酶消化液則無需離心，直接進行步驟7。

6、棄上清，用wan全培養(yǎng)基懸浮細胞。

7、按照6000-8000個細胞/cm²的密度進行傳代，例如T175培養(yǎng)瓶中加入25mL細胞懸液。

8、均勻鋪在培養(yǎng)皿或瓶底部，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

9、每2-3天更換一次wan全培養(yǎng)基，并記為P2、P3等。

間充質干細胞凍存

1、待細胞融合度達到80-90%左右時，可進行細胞凍存。

2、收集細胞，將細胞團重懸在1mL無血清細胞凍存液（貨號B04001）中。

3、裝入凍存管，無需程序降溫可直接-80℃冰箱保存1年。

注：如需轉入液氮罐中長期凍存，可在-80℃保存一天后轉入液氮罐中。

注意事項

1、MSC分離時確保組織塊始終貼壁，換液動作要輕柔，避免沖動組織塊。

2、MSC分離過程中尤其是初期更換培養(yǎng)基量不宜過多，以免組織塊漂浮。

3、本產(chǎn)品基于UltraGRO™-Advanced添加劑開發(fā)，適配性非常好，可直接使用。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5、本產(chǎn)品僅用于科學研究使用，不得用于診斷或治療。