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動(dòng)物源性DNA檢測(cè)試劑盒如何去操作呢?

閱讀:2030        發(fā)布時(shí)間:2020/4/15
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       動(dòng)物源性DNA檢測(cè)試劑盒是為專(zhuān)業(yè)的高通量實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的,但是現(xiàn)在這種試劑盒是適合中低等通量的實(shí)驗(yàn)室使用,這個(gè)試劑盒專(zhuān)門(mén)為每天需要制備的樣品量達(dá)到100個(gè)的實(shí)驗(yàn)室而設(shè)計(jì)。
  該試劑盒在連接探針末段引入不同長(zhǎng)度的標(biāo)簽序列,獲得長(zhǎng)度各異的目的探針連接產(chǎn)物,利用熒光標(biāo)記的通用引物對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,通過(guò)熒光毛細(xì)管電泳對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離檢測(cè),后通過(guò)對(duì)電泳圖譜的分析獲取各個(gè)位點(diǎn)的峰高,進(jìn)而對(duì)樣品目的區(qū)域的拷貝數(shù)進(jìn)行分析。
  建議使用試劑配套動(dòng)物基因組DNA提取系列產(chǎn)品,具體過(guò)程詳見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。剪下所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管,放置在室溫待解凍后,離心30秒后揭開(kāi)封口膜,向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板,順序?yàn)镹G、待測(cè)樣品模板。蓋好配套的PCR管蓋后,渦旋混勻30秒,離心1分鐘,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
  1、需要按試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好動(dòng)物源性DNA檢測(cè)試劑盒各種組分的工作液。
  2、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
  3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
  4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,樣本孔加待測(cè)樣本50μL,空白孔不加。
  5、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
  6、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL。
  7、揭開(kāi)封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
  8、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL,用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘;
  9、如此重復(fù)4次,若使用自動(dòng)洗板機(jī),請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡20秒的程序,可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。

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