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Stbl3感受態(tài)細(xì)胞的簡要說明

閱讀：669      發(fā)布時間：2025-2-26
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Stbl3菌株來源于HB101 E.coli strain，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株?；蚪M含有重組酶recA13突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有LIAN霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。 
High5TM系列Stbl3感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg DNA。
操作說明：
1.Stbl3感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 
2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 
3.向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基（推薦使用SOC培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)化效率）。
4.30℃，225rpm復(fù)蘇90分鐘。（當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control PUC19計算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃，225rpm復(fù)蘇60分鐘。） 
5.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.培養(yǎng)基上。 
6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。（若轉(zhuǎn)化controlPUC19計算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜）

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