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轉(zhuǎn)化細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)三種方式
閱讀：161 發(fā)布時(shí)間：2017-9-29轉(zhuǎn)化細(xì)胞是腺病毒載體的包裝細(xì)胞。腺病毒是繼逆轉(zhuǎn)錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導(dǎo)入人體內(nèi)表達(dá)目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進(jìn)展;利用腺病毒載體在包裝細(xì)胞293中表達(dá)分泌性蛋白質(zhì)，如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成為重組蛋白的一條途徑。因此完善293細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)具有越來越重要的市場意義。哺乳細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方式有三種：貼壁培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、無血清懸浮培養(yǎng)。這三種方式均可用于293細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)。
細(xì)胞特性
細(xì)胞是用5型腺病毒75株系轉(zhuǎn)化，含有Ad5 E1區(qū)的人胚腎細(xì)胞。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建而成。293細(xì)胞是貼壁依賴型成上皮樣細(xì)胞，表現(xiàn)出典型的腺病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的表型，細(xì)胞允許Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。293細(xì)胞為人亞三倍體細(xì)胞系。293細(xì)胞在無Ca2+或含Ca2+培養(yǎng)基中可同樣生長，也可生長在血清濃度降低的培養(yǎng)基中。
轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)
轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)一般用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過渡階段，或作為生物反應(yīng)器接種細(xì)胞準(zhǔn)備的一條途徑。與傳統(tǒng)靜止單層培養(yǎng)相比，轉(zhuǎn)瓶具有三大優(yōu)點(diǎn)：為細(xì)胞提供較大的生長表面;輕微的轉(zhuǎn)動(dòng)可以防止培養(yǎng)液中形成的某些成分對(duì)細(xì)胞生長可能產(chǎn)生的影響;細(xì)胞大部分時(shí)間僅覆蓋一薄層培養(yǎng)液，有利于氣體交換。我們已成功實(shí)現(xiàn)293細(xì)胞的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。由于293細(xì)胞對(duì)生長環(huán)境的改變較為敏感，細(xì)胞容易成團(tuán)，因此維持穩(wěn)定的溫度、酸堿度和轉(zhuǎn)動(dòng)速度對(duì)細(xì)胞正常均勻生長至關(guān)重要。
現(xiàn)在使用的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)包括二氧化碳培養(yǎng)箱和轉(zhuǎn)瓶機(jī)兩部分。293細(xì)胞接種后，維持適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速培養(yǎng)。不同的細(xì)胞轉(zhuǎn)速略有不同。細(xì)胞的均勻分散貼壁情況與培養(yǎng)液溫度、瓶子的轉(zhuǎn)動(dòng)速度和細(xì)胞特性有關(guān)。在5-6天的培養(yǎng)周期中，細(xì)胞量可增殖20倍。
反應(yīng)器貼壁培養(yǎng)
此種培養(yǎng)方式中，轉(zhuǎn)化細(xì)胞貼附于固定的表面生長，不因?yàn)閿嚢瓒S培養(yǎng)液一起流動(dòng)，因此比較容易更換培養(yǎng)液，不需要特殊的分離細(xì)胞和培養(yǎng)液的設(shè)備，可以采用灌流培養(yǎng)獲得高細(xì)胞密度，能有效地獲得一種產(chǎn)品;但擴(kuò)大規(guī)模較難，不能直接監(jiān)控細(xì)胞的生長情況，故多用于制備用量較小、價(jià)值高的生物藥品。
進(jìn)口/國產(chǎn) RT 維生素C測試盒 1000支/包
* 5’-核苷酸酶測試盒 1000支/包
* RT D-木糖測試盒 1000支/包
* RT 糖化血紅蛋白測試盒 1000支/包
進(jìn)口/國產(chǎn) 糖化血清蛋白測試盒(果糖胺法，帶標(biāo)準(zhǔn)) 1000支/包
* RT 肝/肌糖元測試盒 1000支/包
* RT 脂蛋白（a）測試盒 1000支/包
* 脂肪酶測試盒 500支/包
進(jìn)口/國產(chǎn) RT 總脂酶測試盒【脂蛋白脂酶(LPL) 1000支/包
轉(zhuǎn)化細(xì)胞