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公司動態(tài)

轉(zhuǎn)化細胞消化培養(yǎng)法的步驟

閱讀:87          發(fā)布時間:2017-12-29

1.準備:轉(zhuǎn)化細胞取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。
4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。
5.消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6.分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000轉(zhuǎn)/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7.計數(shù):用計數(shù)板計數(shù),如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整。
8.培養(yǎng):轉(zhuǎn)化細胞置于36.5℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
Erythromycin Gluceptate    23067-13-2    葡庚糖酸紅霉素標準品    200mg
Erythromycin Lactobionate    3847-29-8    乳糖酸紅霉素標準品    200mg
Erythromycin Stearate    643-22-1    硬脂酸紅霉素標準品    200mg
Escitalopram Oxalate    219861-08-2    草酸艾司西酞普蘭對照品標準品    200mg
Estradiol Cypionate    313-06-4    環(huán)戊丙酸雌二醇標準品    200mg
Estrone    53-16-7    雌酚酮標準品    200mg
Ethacrynic Acid    58-54-8    利尿酸標準品    200mg
Ethambutol Hydrochloride    1070-11-7    鹽酸乙胺丁醇標準品    200mg
Ethionamide    536-33-4    乙硫異煙胺標準品    200mg
Ethotoin    86-35-1    乙苯妥英標準品    200mg
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