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牛腎細胞;MDBK技術(shù)參數(shù)

閱讀:268          發(fā)布時間:2017-8-10
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牛腎細胞;MDBK技術(shù)參數(shù):
細胞接受后處理
1) 收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
 
 2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
 
 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
 
 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
 
 5) 接到細胞次日,請檢查細胞是 否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉谩?br /> 
一.貼壁細胞  
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當(dāng)細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二.牛腎細胞;MDBK懸浮細胞 
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

三.2ml小管操作方法。 
1. 用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)。
2. 嚴(yán)格無菌操作,用吸管吸出管中細胞至6ml*培養(yǎng)基混勻。
3換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO7  培養(yǎng)。
人纖維蛋白溶酶    進口、國產(chǎn)    英文名稱:    Fibrinolysin    含量:    BR,5u/ul,99%
殼多糖酶    進口、國產(chǎn)    英文名稱:    Chitinase    含量:    BR,5u/ul,99%
羥基甾族化合物氧化還原酶    進口、國產(chǎn)    英文名稱:    HSD    含量:    BR,5u/ul,99%
肌氨酸氧化酶    進口、國產(chǎn)    英文名稱:    Sarcosine Oxidase    含量:    BR,5u/ul,99%
牛腎細胞;MDBK

 

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