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DNA提取的類型與基本原則
DNA提取的類型與基本原則
核酸提取通常是開啟生物學(xué)研究的第一步，而且提取的核酸質(zhì)量高低也是決定下游實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素之一，那么你知道DNA提取的類型與基本原則是什么嗎？讓我們一起來看看吧！
一、核酸提取類型：
1.總RNA提取
總RNA中，75-85%為rRNA（主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA），其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA及核仁小分子RNA等組成。
2.miRNA提取
MicroRNAs（miRNAs）是小型的、高度保守的RNA分子，如小干擾RNAs（siRNAs），通過與他們的堿基配對(duì)調(diào)節(jié)其同源mRNA的分子表達(dá)，以預(yù)防通過各種機(jī)制的表達(dá)。他們已成為進(jìn)行發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞周期的重點(diǎn)監(jiān)管機(jī)構(gòu)。
3.基因組DNA提取
進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)和功能研究以及基因診斷，通常要求得到的片段長(zhǎng)度不小于100～200kb。在DNA提取過程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。
4.質(zhì)粒抽提
質(zhì)粒抽提方法即去除RNA，將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組DNA分開，去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)，以得到相對(duì)純凈的質(zhì)粒。
二、DNA提取的基本原則
1.保證DNA結(jié)構(gòu)的完整性
不同的下游實(shí)驗(yàn)對(duì)于DNA結(jié)構(gòu)的完整性有所區(qū)別。如PCR、Southern雜交這一類實(shí)驗(yàn)基本保證所需片段的完整，而二代測(cè)序?qū)嶒?yàn)為了獲得全面的序列信息對(duì)DNA的完整性要求更高。
2.保證DNA的純度
去除對(duì)下游實(shí)驗(yàn)中酶分子有抑制作用的有機(jī)溶劑和高濃度金屬離子，將蛋白質(zhì)、多糖、多酚等生物大分子的污染降到低，去除其他核酸。
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