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2025/02/13
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細胞實驗中支原體污染是較為麻煩的問題，困擾著很多科研人。今天跟大家分享的是實驗室支原體檢測方法。
培養(yǎng)法：使用支原體肉湯培養(yǎng)基接種待測樣品（細胞培養(yǎng)上清等），經過約7-21天的培養(yǎng)，觀察有無支原體的生長，以此來判斷細胞培養(yǎng)基中有無支原體存在。該方法雖然經濟可靠，但實驗周期較長，所以常用來進行對懷疑細胞的最后甄別。
熒光指示細胞法：該方法較為快捷，方法簡單，但其靈敏度有一定的欠缺，易造成漏檢。
PCR法：PCR 法檢測支原體的方法最為快速、靈敏、取樣量少，既可做細胞本身，也可做細胞上清的檢測，同時可以檢測多種支原體的污染，是目前常用的檢測手段。但其成本較高，條件要求嚴格，且有時易出現假陽性或假陰性。彌補的方法是對懷疑的樣品要經過3 次PCR 檢測，或用培養(yǎng)法檢測。
DNA染色法：使用DNA染色試劑（如：Hoechst 33258）對細胞進行染色，由于支原體中的核酸也可以被著色，所以，如果有支原體污染，會在細胞表面或者培養(yǎng)基中見到大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒，與細胞核呈現的橢圓形、更大更亮熒光形成鮮明對比。
不同的實驗室可根據具體情況選擇不同的方法或幾種方法聯(lián)合使用以保證檢測的準確性和靈敏度。
