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細胞治療項目中,支原體檢測的必要性

閱讀:741      發(fā)布時間:2023-10-13
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細胞治療是用具有活性細胞制劑為主要成分來治療或預防疾病的技術,細胞治療領域的研究熱點是干細胞和免疫細胞,應用這些技術,需要遵照相應的法律、法規(guī)與行政管理規(guī)定,其細胞來源、生產工藝和臨床應用過程進行污染物的監(jiān)控與檢測。

 

當細胞受到支原體污染初期,通常難以觀察到細胞的生長和形態(tài)方面的明顯變化。然而,如果支原體污染嚴重,會導致細胞生長速度減緩,并在細胞之間形成膜片狀的附著結構。此外,支原體的存在會抑制宿主細胞的核酸蛋白合成,影響細胞內一些重要酶和細胞因子的正常功能。這些影響最終會導致細胞增殖受到抑制,甚至停止,導致細胞碎片逐漸增多,最終導致細胞死亡。

 

不僅如此,如果細胞或者細胞產物被支原體污染,一旦此類藥物用于臨床,將造成不可挽回的后果。因此,在細胞治療項目中,需要對是否存在支原體污染進行檢測。常用的方法為qPCR的方法。

 

支原體熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監(jiān)測,簡稱qPCR。該方法的優(yōu)點:

①靈敏度高、特異性強。

②時間短,2-3小時出結果

③檢測結果可定量

④操作簡便

 

德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針法檢測),依據操作步驟的細微差別, 分『經典法』和『一步法』兩種。  

此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品,具有以下優(yōu)點:

①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規(guī)定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察(使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應)。


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