1640細胞培養(yǎng)液的配制方法說明

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1) 配制培養(yǎng)基使用新制備的三蒸水。一般在試驗前當天或前一天制備為好。調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配制。

2) 制備培養(yǎng)基的器皿清洗要干凈，烤干后備用(濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養(yǎng)基的小瓶等存放和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基液體的器具都應(yīng)進行滅菌)。

3) 溶解培養(yǎng)基：將干粉培養(yǎng)基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內(nèi)面兩次，倒入培養(yǎng)液中。振蕩或超聲助溶，一般不要加熱助溶。

4) 補加試劑：根據(jù)包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3(2.0g)、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等其他試劑。

5) 加抗生素：一般抗生素終濃度為――青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml。市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，每一升培養(yǎng)液中加0.5ml即可。市售鏈霉素為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，每一升培養(yǎng)液中也加0.5ml即可。無鏈霉素的情況下，用慶大霉素代替，終濃度調(diào)為50～200U/ml。

6) 調(diào)pH值：加水到900ml(在需要加10%小牛血清的情況下)，然后用5% NaHCO3調(diào)節(jié)pH到7.2。

7) 過濾除菌：宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，以保證過濾效果。注意濾膜正面(光面)朝上。過濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。

8) 加小牛血清：根據(jù)培養(yǎng)基配制的量將小牛血清分裝，冷凍保存(-20℃)。臨用前將加入小牛血清(10%~20%)。

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