提取外周血淋巴細(xì)胞時(shí)需要注意的事項(xiàng)

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如果取外周血淋巴細(xì)胞 (PBMC) 進(jìn)行ELISPOT檢測，采用新鮮血液。在保證無菌操作的前提下，首先應(yīng)保證取血時(shí)抗凝劑應(yīng)及時(shí)充分的與血液混勻，避免血凝塊的出現(xiàn)?？鼓皶r(shí)提取PBMC，避免放置時(shí)間過長，室溫下避免夜。應(yīng)選用分離效果好的淋巴細(xì)胞分離液，避免PBMC中混有過多其他細(xì)胞成分或雜質(zhì)。

外周血出現(xiàn)溶血后，在使用淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC時(shí)，溶血產(chǎn)生的細(xì)胞碎片、血紅素等雜質(zhì)將極大可能懸浮于分離液的層面，在吸取PBMC時(shí)非常容易混入這些雜質(zhì)，由于混入細(xì)胞的細(xì)胞碎片和血紅素很難清洗去除，在進(jìn)行Elispot實(shí)驗(yàn)時(shí)，有可能沉積在培養(yǎng)板底，嚴(yán)重影響細(xì)胞因子和抗體的結(jié)合，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

使用淋巴細(xì)胞分離液，推薦使用進(jìn)口淋巴細(xì)胞分離液，如：Lymphoprep，或者NycoPrep 1.077（無寡糖）。避免使用紅細(xì)胞裂解液分離淋巴細(xì)胞。

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