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原代細胞增殖生長數(shù)值的步驟

時間:2018/4/17閱讀:176
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測定原代細胞增長數(shù)值常用zui簡便的方法。

一般過程為

1. 接種21 孔/24 孔板細胞(如用培養(yǎng)瓶時則21 瓶)。

2. 分7 組,每組3 孔(或瓶),培養(yǎng)一周(7 天),期間逐日檢測一組,計數(shù)。

3. 把7 天中的細胞數(shù)值繪成圖,即為細胞生長曲線。
實驗材料    
細胞
試劑、試劑盒    
胰蛋白酶
儀器、耗材    
吸管
實驗步驟    1. 懸液制備

取待測生長狀態(tài)良好細胞,增長至接近匯合時,向培養(yǎng)瓶內(nèi)加1 ml升0.25 %胰蛋白酶液,37 ℃溫箱中消化,至細胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養(yǎng)液、輕吹打制備成細懸液、計數(shù);

2. 接種

向每孔中接種等量細胞,置溫箱中培養(yǎng);把培養(yǎng)瓶中營養(yǎng)液倒入試管中并記錄下毫升量;

3. 計數(shù)檢測

從次日起,即開始檢測*組每個孔(或瓶)中的細胞總數(shù),用計算盤或用細胞自動計數(shù)器計數(shù),取3 個孔的均值,如此至第7 組結(jié)束;

4. 繪圖

用座標圖紙繪成生長曲線。
收起
注意事項    
1. 計數(shù)法簡便易行,但不夠,約有20 %~30 %的誤差。為提高準確性,每孔也應(yīng)計算2~3 次,則總和每組計算總次數(shù)達6 次~12 次,均值可能更為。

2. 原代細胞數(shù)量增加1 倍的時間稱倍增時間,亦可從細胞生長曲線中測知。
Neotame Related Compound A    15mg    紐甜相關(guān)物質(zhì)A標準品    
Nevirapine Anhydrous     100mg    無水奈韋拉平標準品    129618-40-2 
Nevirapine Hemihydrate     100mg    半水奈韋拉平標準品    129618-40-2 
N-Glycolylneuraminic Acid     200mg    N-羥乙酰神經(jīng)氨酸標準品    1113-83-3 
Niacin    200mg    煙酸標準品    59-67-6
Niacinamide (Vitamin B3)    500mg    煙酰胺標準品    98-92-0 
Nicotine Bitartrate Dihydrate     500mg    二水合重酒石酸尼古丁標準品    6019/6/3
Nifedipine     125mg    硝苯地平標準品    21829-25-4 
Nimodipine     125mg    尼莫地平標準品    66085-59-4 
Nitazoxanide    200mg    硝唑尼特標準品    55981-09-4 
原代細胞

 

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