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腫瘤細(xì)胞的比率及分選后的回收率

時間:2017/12/26閱讀:1030
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在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞分選前,保留一小部分起始樣本是非常重要的。這樣有助于評估分選前樣品中目標(biāo)細(xì)胞的比率及分選后該細(xì)胞的回收率。

各種組織和細(xì)胞來源中的細(xì)胞比率可以根據(jù)已發(fā)表的數(shù)據(jù)來估算。然而,實際操作中,細(xì)胞比率可能因供體而異,并且取決于是否來自正常的、患病的還是轉(zhuǎn)基因的樣本。

細(xì)胞回收率:

計算分選后的細(xì)胞回收率是評估實驗是否成功的寶貴工具。需要準(zhǔn)確地得到以下四個數(shù)據(jù): 

分選前起始樣本中的細(xì)胞總數(shù)*
目標(biāo)細(xì)胞在起始樣本中的比率*
分選后的細(xì)胞總數(shù)
分選后目標(biāo)細(xì)胞的純度

使用以下公式計算細(xì)胞回收率:
回收率 = [(3) x (4)] / [(1) x (2)] X 100%

*為方便起見,您可以在實驗結(jié)束時將預(yù)留的起始樣本與您的分選后(富集)樣本一并進(jìn)行分析。 

細(xì)胞總數(shù):

起始樣本和富集樣本中的細(xì)胞總數(shù)可以通過的細(xì)胞計數(shù)來確定。理想情況下,應(yīng)評估有核細(xì)胞(TNC)的總數(shù)和細(xì)胞活率,但是計算細(xì)胞回收率只需要TNC計數(shù)。如果使用自動化系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),需注意僅計數(shù)白細(xì)胞(排除紅細(xì)胞)。 

目標(biāo)腫瘤細(xì)胞的純度:
起始樣本和富集樣本中目標(biāo)細(xì)胞的比率(或純度百分比)可以通過流式細(xì)胞儀來確定。細(xì)胞分選試劑盒的產(chǎn)品說明書為如何評估該特定細(xì)胞的純度提供了建議。要注意,一些陽性分選試劑盒可能存在表位占據(jù)問題,因此需要遵循產(chǎn)品說明書的指示,以確保準(zhǔn)確地評估細(xì)胞純度(例如使用特異性抗體克隆,或在進(jìn)行細(xì)胞分選時,同時加入染色抗體和分選抗體混合物)。另外,需要注意對活細(xì)胞設(shè)門以提高準(zhǔn)確性。
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