雜交瘤細(xì)胞技術(shù)分析

時間：2017/2/7閱讀：475

雜交瘤細(xì)胞技術(shù)分析

克隆化的細(xì)胞可以在體外進行大量培養(yǎng)，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化抗體。不過體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過特定的細(xì)胞濃度，且每天要換培養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來的腫瘤細(xì)胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無胸腺的裸鼠），雜交瘤細(xì)胞就開始無限地繁殖，直至宿主死亡。產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹水和血清中含有大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體，這種抗體的效價往往高于培養(yǎng)細(xì)胞上清液的100~1000倍。

利用免疫抑制劑，如降植烷、液體石蠟、抗淋巴細(xì)胞血清等，可以加速和促進腫瘤的生長。

1．材料（1）經(jīng)高壓滅菌的降植烷。

（2）Balb/c鼠：5~8周齡。

（3）雜交腫瘤細(xì)胞：取對數(shù)生長期的細(xì)胞。

（4）RPMI—1640培養(yǎng)液

（5）新生牛血清

2．操作方法

(1)于小鼠腹腔注射0.5ml降植烷，注射后1～9周內(nèi)種植細(xì)胞。

(2)收取對數(shù)生長期的雜交瘤細(xì)胞，用5%FCS—1640液洗滌一次，1000r/min離心10min。

(3)取樣，用臺盼蘭染色，計活細(xì)胞數(shù)，重新用5%FCS—1640液配成1.0×107細(xì)胞/ml的懸液。

(4)給注射了降植烷的小白鼠接種雜交腫瘤細(xì)胞，每只腹腔注射1ml（含1.0×107個細(xì)胞/ml）。

(5)接種后10天左右時間腫瘤體積zui大，此時可由腹腔抽取腹水，每隔1~3天取1次，可取10次。血清可由腋下動脈或心臟采血后分離。

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