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檢測轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖Z準(zhǔn)確可靠的方法

時間:2018-3-21閱讀:290
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檢測DNA合成是目前檢測轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖zui準(zhǔn)確可靠的方法,目前常用的方法有如下幾種:
(1)3H-胸腺嘧啶核苷滲入法(3H-TdR):胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前體物,處于S期的細(xì)胞不斷地攝取TdR用以合成DNA。3H-TdR摻入法是將被放射性標(biāo)記的3H-TdR摻入DNA合成期的細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)3H-TdR摻入量的多少可客觀反映細(xì)胞復(fù)制DNA能力的大小,從而問接了解細(xì)胞增殖情況。通過檢測。H放射活性即可反映DNA含量。
1976年Mattem等首先采用此方法做體外藥敏試驗。此后經(jīng)過長期的廣泛研究,也己證實該法對各種動物腫瘤及人類腫瘤均有較好的預(yù)測價值和重復(fù)性,主要用于細(xì)胞增殖的檢測與藥物敏感性試驗等。但這種方法操作復(fù)雜,試劑含有同位素,具有放射性,對實驗者有一定的危害,故限制了它的應(yīng)用。
(2)BrdU檢測法:BrdU中文全名為5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)摻入,而后利用抗BrdU的抗體耦聯(lián)不同的酶,加入不同發(fā)光特性的底物,然后再通過比色法、化學(xué)發(fā)光檢測或熒光信號檢測底物強(qiáng)度等步驟,反映BrdU的摻入量。該方法不需要再和放射性物質(zhì)打交道。
(3)EdU檢測法:BrdU雖然解決了接觸同位素的問題,但該方法需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu),對某些后續(xù)或同時進(jìn)行的試驗,如其他染料的結(jié)合染色有影響?,F(xiàn)在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發(fā)生——EdU檢測。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團(tuán)在天然化合物中很少見,在轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以進(jìn)行快速的細(xì)胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單,更快速,更準(zhǔn)確。
鑒別    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    組氨酸    20mg/支    英文名稱    110890-200001    規(guī)格:
鑒別    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    黃山藥皂苷提取物    20mg/支    英文名稱    110891-200001    規(guī)格:
含量測定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    積雪草苷    20mg/支    英文名稱    110892-200604    規(guī)格:
鑒別    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    羥基積雪草苷    20mg/支    英文名稱    110893-200201    規(guī)格:
含量測定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    甜菜堿    20mg/支    英文名稱    110894-200503    規(guī)格:
含量測定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    雪上一枝蒿甲素    20mg/支    英文名稱    110895-200303    規(guī)格:
鑒別    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    琥珀酸    20mg/支    英文名稱    110896-200001    規(guī)格:
含量測定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    α-蒎烯    20mg/支    英文名稱    110897-200001    規(guī)格:
含量測定    含量:    進(jìn)口/國產(chǎn)    γ-亞麻酸甲酯    20mg/支    英文名稱    110898-200503    規(guī)格:
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

 

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