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上海仁捷生物科技有限公司

人胰島素原 (PI)ELISA kit使用說(shuō)明書

時(shí)間:2023/12/21閱讀:1289

人胰島素原  (PI)ELISA使用說(shuō)明書

胰島素原(PI)是胰島素的前體激素  它是由由胰島β細(xì)胞合成和分泌 , 主要 在腎臟分解代謝。生理情況下 ,只有極少量的胰島素原釋放入血 ,在病理情 況下 ,胰島β細(xì)胞釋放胰島素原增多 ,血中胰島素原水平升高。 它是細(xì)胞在 裂解成成熟胰島素之前分泌的最后一個(gè)單鏈蛋白結(jié)構(gòu)。 它是由芝加哥大學(xué)的Donald F. Steiner教授在1967年發(fā)現(xiàn)的。


本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA 。往預(yù)先包被有人 胰島素原(PI)捕獲抗體的微孔中 ,依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記的檢測(cè) 抗體 HRP  酶結(jié)合物 , 中間經(jīng)過(guò)溫育和洗滌 ,用底TMB  顯色 TMB 在過(guò) 氧化物酶(HRP)的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色 ,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色 的深淺和樣品中的人胰島素原(PI)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm  波長(zhǎng)下測(cè)定

吸光度(OD   ,計(jì)算樣品濃度。

靈敏度:4.79pg/mL

檢測(cè)范圍12.5-800pg/mL

特異性:可檢測(cè)樣本中人的PI ,且與其類似物無(wú)明顯交叉反應(yīng)。

image.png

濃度(pg/mL)

800

400

200

100

50

25

12.5

0

OD  

2.32

1.93

1.31

0.85

0.51

0.39

0.28

0.1

校正 OD  

2.22

1.83

1.21

0.75

0.41

0.29

0.18

-


試劑盒性能:

1.    重復(fù)性 :板內(nèi)變異系數(shù)小于  10% ,板間變異系數(shù)小于  10%。

2.    回收率 :在選取的健康人血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入  3  個(gè)不同

濃度水平的人PI ,計(jì)算回收率。

 

樣本類型

范圍(%

平均回收率(%

血清(n=8)

84- 101

96

血漿(n=8)

92- 105

102

細(xì)胞培養(yǎng)上清(n=8)

96- 108

105

3.    線性稀釋:分別在選取的4份健康人血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入

高濃度人PI ,在標(biāo)準(zhǔn)曲線動(dòng)力學(xué)范圍內(nèi)進(jìn)行稀釋 ,評(píng)估線性。

 

稀釋比例

回收率(%

血清

血漿

細(xì)胞培養(yǎng)上清

12

范圍

 

84-95

 

88-97

 

90- 110

平均回收率

 

91

 

93

 

96

14

范圍

89- 103

87- 108

105- 115

平均回收率

94

98

109



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