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藥典級(jí)牛津杯測(cè)定抗生素的抑菌實(shí)驗(yàn)

閱讀:8460        發(fā)布時(shí)間:2017-7-16

藥典級(jí)牛津杯測(cè)定抗生素的抑菌實(shí)驗(yàn)
 

一、目的:觀察抗生素的抑菌效果,掌握藥典級(jí)牛津杯體外測(cè)定抗生素的抗菌活性。 
二、原理: 抗生素從孔洞向瓊脂培養(yǎng)基擴(kuò)散滲透,通過(guò)對(duì)試驗(yàn)菌的抑殺作用而影響細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖,使菌落形成抑菌圈,依抑菌圈的大小確定抗生素抗菌能力的強(qiáng)弱。
三、材料 
1. 菌種:金黃色葡萄球菌,用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)16~18 h得到的菌液。
2. 藥品:氨芐青霉素,肉湯培養(yǎng)基。 
3. 器材:藥典級(jí)牛津杯、涂布棒、生化培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、水浴鍋、滅菌肉湯瓊脂培養(yǎng)基、酒精燈、平皿、吸管、0.5cm紙片、鑷子、記號(hào)筆、尺子等。 
四、實(shí)驗(yàn)步驟 
1.按照培養(yǎng)基的配制方法步驟配制好肉湯培養(yǎng)基,并在121℃,滅菌20 min后,放在60 ℃水浴鍋中保溫,注意溫度恒定,不要讓培養(yǎng)基凝固。 
2. 將用于試驗(yàn)的防腐劑(抑菌物質(zhì))配制成2個(gè)所需的濃度(10ug/ml,30ug/ml)。
3.將已經(jīng)培養(yǎng)好的菌制成一定濃度(106cfu/mL)的懸浮液,用移液管移取1 mL該菌懸液至滅過(guò)菌的(121℃,20分鐘)培養(yǎng)皿中,倒入15 mL已滅菌的培養(yǎng)基(溫度約45℃,用手摸瓶壁不感覺(jué)燙手即可),輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基與菌液混勻,靜置凝成平板。 
4.將凝固后的平板用滅菌后的打孔器在平板上打孔(4個(gè)孔洞),并挑出培養(yǎng)基。(或?qū)⒁褱缇乃幍浼?jí)牛津杯依次輕輕放置在平板上) 
5.按照順時(shí)針?lè)较蛞来卧诿總€(gè)孔洞(或藥典級(jí)牛津杯)中加入抑菌劑,以無(wú)菌水做空白對(duì)照,每種抑菌劑的濃度做三個(gè)平行樣。 
6.在37 ℃下培養(yǎng)24 h觀察,用尺子測(cè)量抑菌圈的大小。
五、注意事項(xiàng) 
1.應(yīng)在無(wú)菌條件下操作,試驗(yàn)完畢后及時(shí)滅菌處理。
2.添加抑菌劑的時(shí)候注意滴到其他地方,以免影響觀察。
 

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